[发明专利]一种诱导肌卫星细胞分化为肌管的无血清培养方法在审
| 申请号： | 202210510643.5 | 申请日： | 2022-05-11 |
| 公开（公告）号： | CN114891733A | 公开（公告）日： | 2022-08-12 |
| 发明（设计）人： | 王少刚;黄彬璐;杨玉茹 | 申请（专利权）人： | 上海食未生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/077 | 分类号： | C12N5/077 |
| 代理公司： | 广州市诺丰知识产权代理事务所(普通合伙) 44714 | 代理人： | 许飞 |
| 地址： | 201203 上海市浦*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 诱导 卫星 细胞 化为 血清 培养 方法 | ||
1.一种诱导肌卫星细胞分化为肌管的无血清培养方法，包括如下步骤：
将健康肌卫星细胞加入到1号分化培养基中，培养12 h-72 h；
去除1号分化培养基，加入2号分化培养基，进一步培养至分化为肌管；其中：
所述1号分化培养基为仅添加有终浓度为1-50 μM地塞米松的无血清基础培养基；
所述2号分化培养基为仅添加有终浓度为50-250 nM胰岛素的无血清基础培养基；或
直接将健康肌卫星细胞于3号分化培养基内培养至肌卫星细胞分化为肌管，所述3号分化培养基为仅添加终浓度为50-250 nM胰岛素、1-20 μg/mL转铁蛋白的无血清基础培养基。
2.根据权利要求1所述的无血清培养方法，其特征在于：
所述1号分化培养基为仅添加有终浓度为8-12 μM地塞米松的无血清基础培养基；
所述2号分化培养基为仅添加有终浓度为80-130 nM胰岛素的无血清基础培养基；
所述3号分化培养基为仅添加终浓度为50-150 nM胰岛素、1-20 μg/mL转铁蛋白的无血清基础培养基。
3.根据权利要求1或2所述的无血清培养方法，其特征在于：所述无血清基础培养基选自DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12、F10、CD293、Medium 231、Medium 106以及以此为基础改良的基础培养基中的一种。
4.根据权利要求3所述的无血清培养方法，其特征在于：所述肌卫星细胞在1号分化培养基中的培养时间为24-72 h；和/或
加入2号分化培养基后的培养时间为5-7 d；和/或
所述肌卫星细胞在3号分化培养基中的培养时间为5-10 d。
5.根据权利要求1或2所述的无血清培养方法，其特征在于：所述肌卫星细胞选自小鼠成肌细胞、牛肌肉卫星、猪肌肉卫星细胞中的一种；和/或
所述肌卫星细胞接种的密度为 0.1-5*105个/mL。
6.根据权利要求1或2所述的无血清培养方法，其特征在于：培养条件为37℃、5% CO2。
7.可诱导肌卫星细胞分化为肌管的无血清培养基组合，包括1号分化培养基和2号分化培养基，其中：
所述1号分化培养基为仅添加有终浓度为1-50 μM 地塞米松的无血清基础培养基；
所述2号分化培养基为仅添加有终浓度为50-250 nM 胰岛素的无血清基础培养基。
8.根据权利要求7所述的无血清培养基组合，其特征在于：所述无血清基础培养基选自DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12、F10、CD293、Medium 231、Medium 106以及以此为基础改良的基础培养基中的一种。
9.可诱导肌卫星细胞分化为肌管的无血清培养基，其为仅添加终浓度为50-250 nM胰岛素、1-20 μg/mL转铁蛋白的无血清基础培养基。
10.根据权利要求9所述的无血清培养基，其特征在于：所述无血清基础培养基选自DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12、F10、CD293、Medium 231、Medium 106以及以此为基础改良的基础培养基中的一种。
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