[发明专利]一种干蟾皮蟾毒内酯类成分的制备方法

权利要求书

1.一种干蟾皮蟾毒内酯类成分的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)干蟾皮蟾毒内酯类成分粗提液制备：取干蟾皮药材，切碎，取水作为提取溶剂，浸泡0.5～2小时，然后煎煮0.5～3小时，滤取药液a；药渣再次加入提取溶剂煎煮1～3次，每次煎煮0.5～3小时，滤取药液，药渣共加入提取溶剂煎煮、滤取药液1～3次，药渣煎煮后滤取药液并与上述药液a合并，得干蟾皮蟾毒内酯类成分粗提物溶液；

2)干蟾皮蟾毒内酯类成分澄清液制备：将步骤1)得到的干蟾皮蟾毒内酯类成分粗提物溶液通过至少两级或两级以上膜分离去除不溶性颗粒物、色素及外源性有毒有害物质，得到干蟾皮蟾毒内酯类成分澄清液；

3)干蟾皮蟾毒内酯类成分精制液制备：将步骤2)得到的干蟾皮蟾毒内酯类成分澄清液通过高效制备液相色谱进行精制纯化，收集柱流穿液，即得干蟾皮蟾毒内酯类成分精制液；

4)干蟾皮蟾毒内酯类成分粉末制备：将步骤3)得到的干蟾皮蟾毒内酯类成分精制液浓缩干燥，即得干蟾皮蟾毒内酯类成分纯品粉末；

其中，步骤3)中，高效制备液相色谱制备方式为：样品浓度为0.1～100mg/mL，先用2～9倍柱体积的甲醇进行活化制备液相色谱柱，后用1～10倍柱体积纯水平衡液冲洗色谱柱，上样速度为10～80mL/min；采用等度洗脱、线性梯度洗脱或者台阶梯度洗脱中的一种或至少两种；

所述的洗脱方式为1次淋洗，淋洗溶剂为体积浓度为0％～30％乙醇水溶液，淋洗体积为1～9倍柱体积，流速为10～80mL/min；洗脱干蟾皮蟾毒内酯类成分的溶剂为体积浓度为30％～95％醇水溶液，收集洗脱液，减压浓缩至醇完全除去，浓缩温度为30～70℃；

所述的高效制备液相色谱制备柱填料类型为大孔树脂、硅胶中的一种或两种，其中大孔树脂包括WA30、HPD400、PS-NVP中的一种或至少两种；硅胶包括C18(ODS)、C8、C4、C18YE中的一种或至少两种。

2.根据权利要求1所述的干蟾皮蟾毒内酯类成分的制备方法，其特征在于，步骤1)中，每次加入的提取溶剂的重量为干蟾皮药材重量的2～20倍，煎煮温度为40℃～100℃。

3.根据权利要求1所述的干蟾皮蟾毒内酯类成分的制备方法，其特征在于，步骤2)中，膜分离使用的过滤膜为无机膜或有机膜，膜组件为中空纤维膜、陶瓷膜、卷式膜、管式膜或者平板膜中的一种或至少两种，两级或两级以上膜分离时，分离过程下一级的膜的孔径小于上级膜的孔径。

4.根据权利要求1所述的干蟾皮蟾毒内酯类成分的制备方法，其特征在于，步骤2)中，采用两级膜分离，第一级过滤膜的孔径为100nm～500nm，第二级过滤膜的孔径为5kd～1000kd。

5.根据权利要求3或4所述的干蟾皮蟾毒内酯类成分的制备方法，其特征在于，步骤2)中，膜过滤通量为0.05～2.50L/min，进膜压为0～0.4MPa，过膜温度为15～35℃；步骤1)得到的干蟾皮蟾毒内酯类成分粗提物溶液通过膜后，采用水对膜上的残留物进行洗滤，每50g～1000g干蟾皮药材洗滤水加入量为0.5～10L。

6.根据权利要求1所述的干蟾皮蟾毒内酯类成分的制备方法，其特征在于，步骤4)中的浓缩方式为常压蒸发、减压蒸发、薄膜蒸发、多效蒸发中的一种或至少两种；干燥方式为减压干燥、冷冻干燥、微波干燥、喷雾干燥中的一种或至少两种。