[发明专利]禽肠道上皮细胞及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种禽肠道上皮细胞及其制备方法和应用。一种禽肠道上皮细胞，来源于禽胚小肠段细胞，基因组中含有SV40的大T抗原基因。本发明研究人员发现，在禽胚小肠段细胞基因组中整合SV40的大T抗原基因能够使得禽肠道上皮细胞在体外能长期培养，能够连续培养超过6个月，传代超过30代，并且基因表达稳定，呈现肠道上皮细胞的特异性特征，表达肠道上皮细胞标志分子，适用于禽类肠道健康的相关研究和生物制品的开发。

技术领域

本发明涉及细胞生物学领域，特别是涉及一种禽肠道上皮细胞及其制备方法和应用。

背景技术

肠道器官可分为小肠(十二指肠、空肠和回肠)和大肠(直肠、盲肠和结肠)，前者可抵御外界病原菌的入侵及维持消化道稳态，负责营养物质的消化和吸收；后者主要吸收多余水分。在肠道发育过程中，小肠占主导作用。小肠是重要的免疫和内分泌器官，同时也是营养物质消化吸收的重要场所。小肠上皮是更新最快的组织，其对于维持肠道健康、修复损伤、防止病毒细菌和寄生虫入侵等方面均发挥着重要的作用，对于禽类来说尤其重要。肠道的健康直接关乎禽类的免疫力，一旦禽类的肠道被破坏，禽类的健康就难以保障。因此，对小肠上皮功能的探究具有重要意义，也是促进养禽业健康养殖的重要方面。

体外细胞模型是重要的研究工具，其能通过增加实验的可重复性和样品的可获得性及减少实验动物的使用，促使细胞机制的研究成为可能。但目前仍难以有可用的禽类肠道细胞，仅能通过分离培养肠道原代细胞，原代细胞在添加大量生长因子的条件下才得以维持，而且培养时间一般仅维持在2周以内，不能长期培养，在时间上达不到药物筛选和一些生物制品开发的基本要求，这严重限制了当前禽类肠道健康的相关研究和生物制品的开发。

发明内容

基于此，有必要提供一种能够在体外长期培养的禽肠道上皮细胞。

此外，还提供一种禽肠道上皮细胞的制备方法和应用。

一种禽肠道上皮细胞，来源于禽胚小肠段细胞，基因组中含有SV40的大T抗原基因。

本发明研究人员发现，在禽胚小肠段细胞基因组中整合SV40的大T抗原基因能够使得禽肠道上皮细胞在体外能长期培养，能够连续培养超过6个月，传代超过30代，并且基因表达稳定，呈现肠道上皮细胞的特异性特征，表达肠道上皮细胞标志分子，适用于禽类肠道健康的相关研究和生物制品的开发。

在其中一个实施例中，所述禽胚小肠段细胞包括9胚龄的禽胚小肠段细胞。

在其中一个实施例中，所述禽胚小肠段细胞包括禽胚小肠段细胞。

在其中一个实施例中，所述禽肠道上皮细胞表达肠上皮细胞标志分子，所述肠上皮细胞标志分子包括TJP1。

一种禽肠道上皮细胞的制备方法，以禽胚小肠段细胞为宿主细胞，将SV40的大T抗原基因整合到所述宿主细胞的基因组中。

在其中一个实施例中，所述制备方法包括以下步骤：分离禽胚小肠段细胞；使用含有SV40的大T抗原基因的逆转录病毒载体对所述禽胚小肠段细胞进行转导；细胞传代、筛选及鉴定。

在其中一个实施例中，所述转导时间为36h～60h。

在其中一个实施例中，所述禽胚小肠段细胞包括9胚龄的禽胚小肠段细胞。

在其中一个实施例中，所述禽胚小肠段细胞包括禽胚小肠段细胞。

上述任一实施例所述的禽肠道上皮细胞在制备禽类肠道相关的生物工程产品或体外筛选禽类肠道相关的治疗药物中的应用。

附图说明

图1为实施例1的实验设计流程示意图；

图2为实施例1中岭南黄鸡在9胚龄、11胚龄、13胚龄、15胚龄和18胚龄时的胚胎、全肠段和小肠段示意图；