[发明专利]一种三特异性抗体的设计、制备及用途

说明书

本发明提供了一种三特异性抗体的设计及其制备方法和用途，本发明三特异性抗体包含(a)anti‑Her2单克隆抗体Herceptin，(b)anti‑CD16a(FcgRIIIa)单链抗体scFv，(c)SIRPa D1蛋白，(d)柔性连接子；抗体Herceptin重链C端通过连接子连接anti‑CD16a单链抗体，抗体Herceptin轻链C端通过连接子连接SIRPa D1；对抗体Fc段进行改造，以改变其与受体的结合能力，同时延长蛋白的半衰期；通过SIRPa D1和CD47配体结合可靶向表达CD47的肿瘤细胞；同时可以阻断“别吃我(don’t eat me)”信号而激活巨噬细胞吞噬肿瘤细胞；通过anti‑CD16a特异性结合NK(Nature Killing)细胞；因此通过SIRPa和anti‑CD16a招募肿瘤微环境的巨噬细胞和NK细胞杀伤肿瘤细胞；本发明保证了anti‑CD16a的特异性，不会引起由于结合中性粒细胞表面的CD16b而引起的副作用(中性粒细胞减少，Neutropenia)。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种三特异性抗体的设计、制备及用途。

背景技术

随着肿瘤学与免疫学的不断发展与深入，肿瘤免疫治疗已成为抗肿瘤领域最前沿的治疗手段。现阶段，国内外肿瘤免疫治疗的主要研究方向是免疫检查点抑制剂。CD47一直被行业认为是继PD-1/PD-L1之后，肿瘤免疫领域最重要的靶点，目前全球各地已有无数以CD47为靶点的候选药物处于临床前及临床开发阶段，但目前仍无获批的抗CD47疗法。

CD47广泛表达于多种癌细胞表面，但在红细胞表面也广泛表达，以保护自身不被吞噬。这意味着靶向CD47药物在杀伤肿瘤细胞的同时，也不可避免会误伤红细胞，从而造成红细胞和血小板数量下降导致严重的贫血反应。

本发明是针对Her2、CD47和CD16a的三特异性抗体。Herceptin已成为Her2阳性肿瘤如乳腺癌的标准疗法；CD47-SIRPa“Don’t eat me”通路已被充分证明是有显著临床疗效的靶标；CD16a在NK细胞表面表达。本发明的作用机制包括但不限于以下三个：(1)可以将Her2和CD47双阳性的肿瘤拉到和NK细胞一起，由NK细胞释放Perporin(穿孔素)损伤肿瘤细胞膜后形成通道使NK细胞大量的Gramzyme B(粒酶B)进入肿瘤细胞内直接杀灭肿瘤细胞；(2)同时因为肿瘤细胞的CD47已被三抗的SIRPa D1结合屏蔽，使肿瘤微环境的巨噬细胞不在接受“别吃我(Don’t eat me)”的抑制信号，从而激活巨噬细胞吞噬并杀死肿瘤细胞；(3)抗Her2端还可以直接抑制Her2阳性肿瘤细胞的繁殖。图2展示了本发明药物的作用机理。靶向Her2和CD47的双特异性抗体已有报道，但靶向Her2-CD47-CD16a三特异性抗体未有报道，属于First-In-Class。

由于人CD16蛋白有两种亚型，CD16a与CD16b，CD16a主要表达于NK细胞，也表达于单核细胞和巨噬细胞，属于激活型受体；CD16b表达于中性粒细胞，两种亚型高度同源，因此，抗CD16a的抗体通常也可结合CD16b，往往引起中性粒细胞减少症。此发明中的抗CD16a特异性结合CD16a受体，而不结合CD16b,因此不会引起中性粒细胞减少症。

发明内容

为解决上述问题，本发明公开了一种三特异性抗体的设计、制备和用途；本发明重点解决的关键技术问题是保证anti-CD16a特异性，不与中性粒细胞表面的CD16b结合从而不引起有些抗CD16a抗体所具有的中性粒细胞减少的副作用，同时维持Herceptin抗体和SIRPa D1蛋白的高特异性与高亲和力，最大程度减少由于非特异性结合带来的副作用。

为达到上述目的，本发明的技术方案如下：

本发明的一个目的是提供一种三特异性抗体，所述抗体包含(a)anti-Her2单克隆抗体Herceptin，(b)anti-CD16a单链抗体scFv，(c)SIRPa D1蛋白，(d)柔性连接子。