[发明专利]一种可快速检测sLRP1的试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种可快速检测sLRP1的试剂盒及其应用，属于医学检测领域。该试剂盒包括sLRP1校准品、HRP标记物、二氢吖啶标记物、辅助剂和发光底物液。本发明提供的试剂盒采用双抗体夹心法检测人血清(浆)、脑脊液中sLRP1的含量。将样本、HRP标记物、二氢吖啶标记物一起反应，两个单抗标记物与样本中sLRP1分子结合，使他们在空间上得以相互接近，加入辅助剂和发光底物液，产生闪光型化学发光。该试剂盒检测线性范围为0‑100pg/ml，灵敏度可达到1pg/ml，对浓度分别为5pg/ml和90pg/ml的质控品重复20次检测，CV分别为4.9％和4.0％。

技术领域

本发明属于医学检测领域，尤其涉及一种可快速检测sLRP1的试剂盒及其应用。

背景技术

LRP1是一种内吞受体，属于低密度脂蛋白(low-density lipoprotein,LDL)受体家族成员。这类受体家族的成员都是细胞表面受体并参与胆固醇代谢、胞内运输及细胞信号传导等过程，且在突触可塑性和神经元发育方面起到重要作用。LRP1的分子量为600kDa，它能够结合约40种功能和结构各异的配体。LRP1包含两个异源二聚体肽段，一个是515kDa的重链，它包含与配体结合的结构区域并位于细胞膜外，另一个是包含跨膜区域和细胞质尾域的85kDa的轻链。大多数的LRP1配体与细胞膜外的II和IV区域结合，这些配体中与AD相关的蛋白有ApoE、APP、Aβ和α2巨球蛋白。LRP1能够通过细胞摄取和溶酶体降解途径调控脑内Aβ的清除或者通过转胞吞作用使Aβ通过血脑屏障(blood brain barrier,BBB)进入外周循环。

α和β分泌酶分别主导APP的非淀粉样酶切途径和淀粉样酶切途径。LRP1能被α和β分泌酶水解释放其胞外段可溶性的LRP1(sLRP1)至细胞外液。在血浆、人脑组织和脑脊液中均能检测到sLRP1。

在人类和小鼠的血浆中，sLRP1是外周系统中与Aβ结合的主要蛋白，能够结合70％～90％的游离Aβ。Aβ与sLRP1结合形成的复合物不能通过BBB并且能够被肝脏和肾脏清除。AD患者血浆中sLRP1的水平与正常人相比显著下降，且AD患者血浆中游离的Aβ的含量较正常人高，故导致AD患者外周Aβ转运至脑内的量增加。另外，sLRP1的氧化水平与AD和老龄化相关，在AD患者和AD模型小鼠中氧化的sLRP1不能与Aβ结合。这些结果提示外周sLRP1与Aβ结合水平的下降能促使外周游离的Aβ聚集增多并增加其内流入脑内的量。

目前，可溶性低密度脂蛋白受体相关蛋白1(sLRP1)的定量检测主要是ELISA方法，该方法虽然灵敏度有限，但是操作步骤繁琐、极为耗时，ELISA方法的缺点如下：(1)重复性不好，实验时间长，完成检测过程一般需要40分钟至60分钟；(2)受自身抗体、嗜异性抗体等干扰，易出现假阳性；(3)不论仪器和手工操作，反应过程需清洗2-3次，干扰因素较多，影响最大的是温度和时间；(4)由于抗体或抗原包被在固相载体上，反应的不均一性，线性范围窄，易出现钩状效应即HOOK效应,当抗原抗体比例不合适而导致假阴性的现象，其中抗体过量会产生前带效应；抗原过量会产生后带效应；(5)灵敏度相对较低，只能检测到ng级水平。因此迫切需要精准、快速的检测产品，化学发光法是最好的选择，该技术与ELISA方法检测方法相比，操作简单，反应时间短，10分钟出结果。该方法敏感性与精确度好，检测范围广。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种可快速检测sLRP1的试剂盒，所述试剂盒包括sLRP1校准品、HRP标记物、二氢吖啶标记物、辅助剂和发光底物液。

优选地，所述HRP标记物和二氢吖啶标记物中都含有单克隆抗体。