[发明专利]鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301的菌株水平计数引物及其活菌计数方法

说明书

本发明涉及一种鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301的菌株水平计数引物及其活菌计数方法，引物为：Y3F:TTCAAGCAGTCCAATCCGCA;Y3R:ACCAAGTTCGGAGGCAATGAT。通过菌株特异性的计数专用引物，将计数水平提高至菌株级；通过优化DNA提取流程，提高DNA提取效率；通过添加PMA，去除死菌干扰，最终实现针对鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301的菌株水平的活菌计数。本发明实现特异性菌株（针对Lactobacillus rhamnosus hsryfm 1301）的菌株水平计数，能够在混菌体系中对目的菌株进行计数，具有市场实施的可能性和较好的预期经济效益。

技术领域

本发明涉及一种鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301的菌株水平计数引物及其活菌计数方法，属于生物技术领域。

背景技术

乳酸菌不仅是多种食品的必需生产菌株，而且可以在人体消化道中大量存在，通过代谢产生有机酸、细菌素和双乙酰等天然抑菌物质调整肠道菌群、调节免疫，从而发挥促进肠道健康、改善心血管机能(辅助降血脂)、抗氧化和拮抗致病菌等益生功能。乳酸菌自古以来便在食品发酵中发挥重要作用，随着其益生功能的发现，已被应用于乳制品、婴幼儿食品、发酵肉制品、膳食补充剂及功能性食品当中。然而乳酸菌的发酵特性和益生功能都具有物种间差异，为得到具有综合功能的产品，混菌发酵越来越受到青睐。源于广西巴马长寿村的益生菌鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301益生作用突出，且在混菌发酵时存在更加全面的健康益处。现有手段无法对存在近缘菌株的混合体系中的鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301进行计数。

发明内容

本发明的目的是解决现有技术的不足，针对乳酸菌的菌株水平计数较为困难，现有的平板计数法无法对近缘菌株进行区分，qPCR法能够区分不同种属，但是依赖引物对的特异性，而且会同时对死亡甚至破裂菌体进行计数；提供一种鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301的菌株水平计数引物及其活菌计数方法，本发明设计了1对能够对鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301进行菌株水平计数的引物对，结合PMA屏蔽，能够实现鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301的菌株水平活菌计数。

本发明的目的是这样实现的：鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301的菌株水平计数引物，其特征是，所述引物如下：

引物名称	引物的序列	序列编号
Y3F	TTCAAGCAGTCCAATCCGCA	SEQ ID NO.1
Y3R	ACCAAGTTCGGAGGCAATGAT	SEQ ID NO.2

。

利用鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301的菌株水平计数引物进行活菌计数方法，其特征是，包括以下步骤：