[发明专利]调节端粒酶限速蛋白运动的多肽探针及其复合物和方法

说明书

本发明提供一种调节端粒酶限速蛋白运动的多肽探针及其复合物和应用方法。本发明设计了PKK‑TTP多肽探针和PKK‑TTP/hs多肽探针复合物，其中PKK‑TTP在白光的刺激下(PKK‑TTP+L)可促进细胞核内的端粒酶限速蛋白转移到细胞质中；PKK‑TTP/hs复合物可将hs携带到癌细胞中抑制细胞质中hTERT蛋白的表达，切断细胞核中的hTERT蛋白来源；此外，在白光的刺激下，PKK‑TTP/hs复合物(PKK‑TTP/hs+L)不仅能将hs成功递送到细胞中，减少细胞核内的hTERT蛋白，还能促进hTERT蛋白从细胞核移出进入细胞质；本发明中提供的两种复合物在不同的应用场景中均能够有效减少细胞核中的hTERT蛋白含量，从而达到抑制肿瘤细胞增殖的技术效果。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种调节端粒酶限速蛋白运动的多肽探针及其复合物及方法。

背景技术

细胞核是细胞遗传和代谢活动的控制中心。核膜是一种将细胞核完全包覆的双层膜，提供了一个细胞内区室化的环境，使很多生物学过程在核内发生。核质穿梭是一个重要的生物学过程，可以将信号从细胞质传递到细胞核，调控细胞行为。其中，端粒酶是在细胞核中发挥活性作用的一种核糖核蛋白复合体，通过以自身RNA为模板，催化合成单链TTAGGG重复序列于端粒的3'端，以维持端粒长度。人端粒酶由核糖核酸模板、逆转录酶催化组分(hTERT蛋白)和其他相关蛋白组成。其中，逆转录蛋白是端粒酶活性的主要限速蛋白，催化端粒酶的逆转录酶活性。

在正常人体组织中，端粒酶的活性被抑制。但是，在约85％的癌细胞中，端粒酶被重新激活，使肿瘤细胞能够在细胞分裂中维持端粒长度，实现永生化。研究发现：逆转录蛋白与癌细胞中的端粒酶活性呈正相关关系。端粒酶阳性的癌细胞中人类端粒酶逆转录酶(hTERT)下调会导致肿瘤细胞生长停滞。因此，逆转录蛋白可作为利用端粒酶靶向治疗癌细胞的又一研究目标。

发明内容

基于此，有必要提供一种可调节端粒酶限速蛋白运动的多肽探针复合物及应用方法，能够降低细胞核中hTERT蛋白含量，抑制细胞核内的端粒酶活性，达到防止癌细胞增殖的目的。

本发明采用如下技术方案：

本发明在于提供一种在细胞质中调节端粒酶限速蛋白运动的多肽探针，主要由可经光诱导产生ROS的物质与PKKKRKVKAARRRRRRRR正炔基肽(PKK)反应而成。

具体地，本发明提供一种调节端粒酶限速蛋白运动的多肽探针PKK-TTP，其结构如下式所示：

该PKK-TTP的制备方法包括：采用TTP和序列为PKKKRKVKAARRRRRRRRRRpra的多肽PKK，置于含DMSO和水的混合溶剂体系中，加入抗坏血酸钠盐和溴化亚铜，惰性气氛下反应，纯化，即得。在其中一些实施例中，优选地，TTP和多肽PKK的反应摩尔比为2:1。

本发明还提供一种调节端粒酶限速蛋白运动的多肽探针复合物，所述多肽探针复合物由可经光诱导产生ROS的物质与PKKKRKVKAARRRRRRRR正炔基肽(PKK)偶联后合成多肽探针、再负载hTERT蛋白的小干扰RNA即可形成复合物。

优选地，PKK-TTP/hs由PKK-TTP与hTERT siRNA反应制备而成的PKK-TTP/hs复合物。其制备方法包括：按照上述方法制备PKK-TTP，再将PKK-TTP与hTERT siRNA孵育反应形成，即得。在其中一些实施例中，PKK-TTP与hTERT siRNA的摩尔比为40:1。

本发明还提供上述调节端粒酶限速蛋白运动的多肽探针复合物、PKK-TTP、PKK-TTP/hs在制备降低细胞核内端粒酶限速蛋白含量的产品中的应用。采用PKK-TTP和/或PKK-TTP/hs降低细胞核内端粒酶限速蛋白含量时，需要采用白光刺激。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：