[发明专利]家蚕核型多角体病毒抗性相关的SNP分子标记及其应用

权利要求书

1.家蚕核型多角体病毒抗性相关SNP分子标记，其特征在于：所述SNP分子标记包括Chr3-746标记和Chr27-5071标记；所述Chr3-746标记位于家蚕p50T基因组的3号染色体序列的第14951064位，碱基多态性为G/A；所述Chr27-5071标记位于家蚕p50T基因组的27号染色体序列的第9462596位，碱基多态性为C/G。

2.检测权利要求1所述SNP分子标记的引物，所述引物包括分别用于扩增Chr3-746标记和Chr27-5071标记的引物组；所述用于扩增Chr3-746标记的引物组包括SEQ.ID.NO.1-3所示引物序列，用于扩增Chr27-5071标记的引物组包括SEQ.ID.NO.4-6所示引物序列。

3.根据权利要求2所述的引物，其特征在于，所述用于扩增Chr3-746标记的引物组中SEQ.ID.NO.1所示引物用于匹配A等位基因，SEQ.ID.NO.2所示引物用于匹配G等位基因；所述用于扩增Chr27-5071标记的引物组中SEQ.ID.NO.4所示引物用于匹配G等位基因，SEQ.ID.NO.5所示引物用于匹配C等位基因。

4.根据权利要求2或3所述的引物，其特征在于，所述用于扩增Chr3-746标记的引物组中SEQ.ID.NO.1所示引物和用于扩增Chr27-5071标记的引物组中SEQ.ID.NO.4所示引物采用HEX或VIC荧光探针分别标记；用于扩增Chr3-746标记的引物组中SEQ.ID.NO.2所示引物和用于扩增Chr27-5071标记的引物组中SEQ.ID.NO.5所示引物采用FAM荧光探针分别标记。

5.检测或辅助检测家蚕BmNPV抗性的产品，所述产品包括权利要求1所述分子标记或权利要求2-4任一项所述的引物；所述产品包括检测试剂、试剂盒或芯片。

6.权利要求1所述的SNP分子标记或权利要求2-4任一项所述的引物或权利要求5所述的产品在以下任一方面的应用：

(1)用于家蚕种质资源或者品种的鉴定；

(2)用于家蚕BmNPV病抗性品种纯度的鉴定；

(3)用于家蚕的BmNPV病抗性性状的鉴定；

(4)用于家蚕的分子标记辅助育种；

(5)用于家蚕的BmNPV病抗性基因的定位与鉴定；

(6)用于制备检测家蚕BmNPV病抗性或性状鉴定的产品。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，包括如下步骤：提取待测家蚕样品的基因组DNA；对提取的基因组DNA进行Chr3-746标记和Chr27-5071标记的基因多态性或基因型的检测；根据检测结果进行判断、鉴定或辅助育种。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述检测结果的判断、鉴定或辅助育种方法为：若Chr3-746标记的基因型为GG或Chr27-5071标记的基因型为CC，则待检家蚕为BmNPV病感病家蚕；若Chr3-746标记的基因型为AA或AG且Chr27-5071标记的基因型为GG或GC，则待检家蚕为BmNPV病抗病家蚕。

9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，采用KASP技术检测基因多态性或基因型，所述KASP技术的PCR扩增体系以5μL计为：2.5μL KASP Master Mix(2x)，0.7μL KASP引物组(10μM浓度的F1、F2引物各0.15μL，10μM浓度的R引物0.4μL)，1μL基因组DNA(20～50ng/μL)，加ddH₂O补充体系至5μL。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述KASP技术的PCR扩增程序为：94℃预变性10min；94℃变性20s，65℃退火1min，每个循环退火温度降0.8℃，共10个循环；94℃变性20s，57℃退火1min，共27～30个循环；25℃延伸30s，收集荧光信号。