[发明专利]一种生防复合微生物菌剂及其制备方法和应用

说明书

本发明提供一种生防复合微生物菌剂及其制备方法和应用，所述复合微生物菌剂包括短短芽孢杆菌FJAT‑0809‑GLX，短短芽孢杆菌FJAT‑10623和贝莱斯芽孢杆菌FJAT‑55034，所述短短芽孢杆菌FJAT‑0809‑GLX与短短芽孢杆菌FJAT‑10623、贝莱斯芽孢杆菌FJAT‑55034混合菌株的用量百分比为90％～70％:10％～30％，其中短短芽孢杆菌FJAT‑10623和贝莱斯芽孢杆菌FJAT‑55034的用量为1:1。本发明的复合微生物菌剂对葡萄灰霉病菌、龙眼焦腐病菌、莲雾黑腐病菌、枇杷炭疽病菌、梨炭疽病菌、甘薯灰霉病菌具有抑制作用，并且对葡萄灰霉病具有良好的防治效果。

【技术领域】

本发明涉及微生物领域，具体涉及一种生防复合微生物菌剂及其制备方法和应用。

【背景技术】

葡萄灰霉病由灰葡萄孢(Botrytis cinerea)侵染引起，是葡萄贮藏过程中的毁灭性病害，每年可造成葡萄高达50％的产后损失(张迪等，2017)。目前葡萄灰霉病的防治仍以化学杀菌剂为主，但长期使用化学杀菌剂不仅容易产生抗药性，而且农药残留导致环境污染及威胁人类健康等。绿色防控技术利用生态控制及生物防治等方法实现安全生产及化学农药使用量减少目标，从而构建环境友好型方式的生物控制措施(柯杨等，2017；Smilanicket al.,2010；Chen et al.,2016)。随着消费者对食品中的农药残留和环境安全的日益关注，开发病害控制的替代方法的需求也在不断增加(Rosslenbroich et al.,2000；Romanazzi et al.,2011)，因而，研究和寻找有效安全的葡萄灰霉病生物防治技术和方法，是解决葡萄绿色种植的重要方向之一。在实际生产应用时，复合生防菌对环境的适应性、抗病范围、防效稳定性等方面比单一菌株更有优势，能够提高对植物病害的防治效果(孙菲菲等，2012；Mao et al.,1998)。陈永珍(2013)利用复合生防细菌解淀粉芽孢杆菌和荧光假单胞菌防治烟草灰霉病，对单个菌株和复合菌株进行药效测试并发现，复合菌剂对灰霉病的防效显著高于单一菌剂。谯天敏(2015)利用铜绿假单胞菌和长枝木霉对竹梢枯病进行防治，结果表明两菌株分别对竹梢枯病有良好的防治作用，而将两个菌株混合使用，协同防效很大提高。因此，筛选获得不同功能微生物，进行复合菌剂的研发将更有助于葡萄灰霉病菌的绿色防控。

【发明内容】

本发明要解决的技术问题，在于提供一种生防复合微生物菌剂及其制备方法和应用，该复合微生物菌剂对葡萄灰霉病菌、龙眼焦腐病菌、莲雾黑腐病菌、枇杷炭疽病菌、梨炭疽病菌、甘薯灰霉病菌具有抑制作用，并且对葡萄灰霉病具有良好的防治效果。

本发明是这样实现的：

一种生防复合微生物菌剂，所述复合微生物菌剂包括短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)FJAT-0809-GLX，短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)FJAT-10623和贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)FJAT-55034，所述短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)FJAT-0809-GLX与短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)FJAT-10623、贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)FJAT-55034混合菌株的用量百分比为90％～70％:10％～30％，其中短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)FJAT-10623和贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)FJAT-55034的用量为1:1。

进一步地，所述的一种生防复合微生物菌剂的制备方法，包括如下步骤：

(1)菌株活化：用接种环将短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)FJAT-0809-GLX、短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)FJAT-10623和贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)FJAT-55034分别划线于LB培养基上，并于恒温培养箱中培养48h，并且培养温度为30℃；