[发明专利]玉屏风散总多糖佐剂的制备及其在新城疫疫苗中的应用

权利要求书

1.一种玉屏风散总多糖佐剂的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

1）分别称取黄芪、白术、防风三味药材，将上述新城疫疫苗药材放置于50℃烘箱内进行烘干处理，分别粉碎后过 20目筛备用；

2）将上述药粉按一定的质量配比配置成玉屏风散，并将其置于圆底烧瓶，以100mL石油醚超声 30min，药渣滤过后挥干备用；

3）将玉屏风散按一定的料液比置于相应量去离子水中浸泡1h，然后采用水浴中回流提取，提取后，进行抽滤和浓缩提取液，采用无水乙醇沉淀浓缩12h，取沉淀物进行真空干燥，即可得到玉屏风散总多糖。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述黄芪、白术、防风三味药材的质量配比为1 :1 :1、1 :2 :1或1 :1 :2。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述液料比为1:10、1:15、1:20。

4.一种新城疫疫苗的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

1）以新城疫疫苗的HN氨基酸序列作为制备新城疫亚单位疫苗靶标区域；

2）采用PCR方法扩增获得HN的部分基因序列，将其扩增产物进行分离纯化；

3）将纯化后的产物与载体连接，连接后将重组质粒导入大肠杆菌宿主细胞中进行扩繁；

4）经抗性筛选，将鉴定为重组质粒的大肠杆菌进行蛋白提取，经浓缩沉淀后，即可得到新城疫HN亚单位疫苗。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，PCR扩增用的上下游引物序列分比为5'-cagcacgactctgttaaccg-3'、5'-cgaacaatagcggatgtggg-3'。

6.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述载体为pGEMT-TEaey载体。

7.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述大肠杆菌为JM-109大肠杆菌。

8.一种新城疫疫苗，所述疫苗包括权利要求4-7任一项所述的新城疫亚单位疫苗和权利要求1-3任一项所述的玉屏风散总多糖佐剂。

9.如权利要求8所述的新城疫疫苗，其特征在于，所述新城疫疫苗中新城疫亚单位疫苗和玉屏风散总多糖佐剂的用量配比为1μg：4mg。

10.权利要求1-3任一项所述的玉屏风散总多糖佐剂在制备新城疫疫苗中的用途。