[发明专利]基于SSR标记构建芦笋分子身份证的方法

说明书

本发明公开了基于SSR标记构建芦笋分子身份证的方法，涉及植物品种鉴别领域。本发明提供了一种用于鉴别芦笋品种的分子标记组合，还提供了一种用于鉴别芦笋品种的引物组合。本发明还提供了一种芦笋品种分子身份证的构建方法，包括：采集不同品种的芦笋，利用上述的引物组合对不同品种的芦笋的DNA进行PCR扩增，再对扩增产物进行电泳检测，根据电泳检测结果构建所述芦笋分子身份证。本发明的方法能够快速的构建芦笋品种分子身份证或指纹图谱，克服了以往形态、生理鉴定的技术缺陷。

技术领域

本发明涉及植物品种鉴别领域，特别是涉及基于SSR标记构建芦笋分子身份证的方法。

背景技术

芦笋(Asparagus officinalis L.)，又称石刁柏，为多年生草本植物，具有极高的营养、保健与药用价值。据联合国粮食及农业组织企业统计数据库统计，2014-2020年期间全球和我国芦笋种植面积及产量均呈逐年增长态势。2020年，我国芦笋的种植面积150万亩。芦笋产业发展存在一个限制性问题是种子混杂严重。因芦笋种子价格高，导致一些非F1杂交种、劣质种子、淘汰种子在市场上泛滥，仅靠种子外形很难辨别好坏。由于芦笋是多年生植物，播种后2-3年才能采笋，从产量上确定其好坏，因此，一旦种子质量差，严重影响笋农的利益。如何鉴别芦笋的真伪、品种纯度成为一个亟待解决的问题。分子标记可直接反映个体DNA水平上的差异，不受环境与季节的影响，过程简便且结果可靠，可有效弥补依据表型性状进行品种鉴定的不足。众多分子标记中SSR标记因其数量众多、分布广泛、共显性、重复性好、通用性高，使其成为构建品种分子身份证的较理想的分子标记技术。目前，芦笋全基因组测序已经完成，但未见利用SSR建立芦笋分子身份证的报道。以此方法构建芦笋品种的分子身份证，对种子产业化和品种的知识产权保护有重大意义。

发明内容

本发明的目的是提供基于SSR标记构建芦笋分子身份证的方法，以解决上述现有技术存在的问题，本发明的方法能够快速的构建芦笋品种分子身份证或指纹图谱，克服了以往形态、生理鉴定的技术缺陷。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种用于鉴别芦笋品种的分子标记组合，所述分子标记包括Asp-SSR6C4、Asp-SSR2C6和Asp-SSR3C10，所述Asp-SSR6C4通过如SEQ ID NO：1-2所示引物对扩增得到，所述Asp-SSR2C6通过如SEQ ID NO：3-4所示引物对扩增得到，所述Asp-SSR3C10通过如SEQ ID NO：5-6所示引物对扩增得到。

本发明还提供一种用于鉴别芦笋品种的引物组合，包括3对引物对，所述引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO：1-6所示。

本发明还提供一种用于鉴别芦笋品种的试剂盒，包含上述的引物组合。

本发明还提供一种芦笋品种分子身份证的构建方法，包括：采集不同品种的芦笋，利用上述的引物组合对不同品种的芦笋的DNA进行PCR扩增，再对扩增产物进行电泳检测，根据电泳检测结果构建所述芦笋分子身份证。

进一步地，所述芦笋的品种包括：UC157、格兰德、沃克卓越、沃克先锋、阿特拉斯、阿波罗、千禧、阿根特伊、紫色激情、冠军、硕丰、京绿1、京绿2、京绿3、京绿4、京科1、京科2、京科3、浙丰1、东芝1、东芝2、航育1、航育6和浙丰801。

进一步地，所述PCR扩增的体系为：2xNG PCRMaster Mix 10μL，正向引物0.2μg，反向引物0.2μg，DNA模板50-100ng，加入ddH₂O至总体积20μL。

进一步地，所述PCR扩增的程序为：94℃预变性2min；94℃变性30s；50-56℃退火30s，72℃延伸30s，30个循环；72℃延伸5min。

本发明还提供上述的分子标记组合、引物组合或试剂盒在获取芦笋分子身份证中的应用。