[发明专利]一种高精确性腺嘌呤碱基编辑器及其用途

权利要求书

1.一种融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白自N端至C端包含第一区域和第二区域，第一区域包含ABEs，所述ABEs包含腺嘌呤脱氨酶或其酶促活性成分和nCas9；所述第二区域包含e18蛋白；所述融合蛋白可选的包含位于融合蛋白的第一区域中的和第一区域和第二区域之间的一个或多个接头氨基酸序列。

2.如权利要求1所述融合蛋白，其特征在于：所述ABEs为ABE7.10、ABEmax和ABE8e碱基编辑器中的一种。

3.如权利要求1所述融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白还包括核定位信号片段。

4.如权利要求1所述融合蛋白，其特征在于：所述ABEs为ABEmax时融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.40所示；所述ABEs为ABE8e时融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.41所示。

5.一种分离的多核苷酸，其特征在于：编码如权利要求1至4任意一项所述融合蛋白。

6.如权利要求5所述一种分离的多核苷酸，其特征在于：所述多核苷酸序包含第一区域和第二区域，所述第一区域编码ABEs，所述第二区域编码e18蛋白，所述多核苷酸可选的包含编码位于融合蛋白的第一区域中的和第一区域和第二区域之间的一个或多个接头氨基酸序列。

7.如权利要求5所述一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述ABEs为ABEmax时，所述多核苷酸序列的构建方式如下：

基因修饰前的ABEmax基因序列如SEQ ID NO.2所示；能有效扩增目的e18基因片段1的上游引物序列F1如SEQ ID NO.3所示，下游引物序列R1如SEQ ID NO.4所示；能有效扩增目的e18基因片段2的上游引物序列F2如SEQ ID NO.5所示，下游引物序列R2如SEQ ID NO.6所示；能有效扩增出的带酶切位点的e18片段基因序列上游引物序列F3如SEQ ID NO.7所示，下游引物序列R3如SEQ ID NO.8所示，带有双酶切位点的e18基因序列如SEQ ID NO.9所示；将酶切SEQ ID NO.9后的片段与酶切SEQ ID NO.2后的片段连接得到的序列如SEQ ID NO.1所示的多核苷酸序列。

8.如权利要求1所述一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述ABEs为ABE8e时，所述如SEQ ID NO.10所示的多核苷酸序列的构建方式如下；基因修饰前的ABE8e基因序列如SEQID NO.11所示；带有双酶切位点的e18基因序列如SEQ ID NO.9所示，将片段SEQ ID NO.9与酶切SEQ ID NO.11后的片段进行连接得到的序列如SEQ ID NO.10所示的多核苷序列。

9.一种构建体，其特征在于：所述构建体含有如权利要求5至8任意一项所述多核苷酸。

10.一种表达系统，其特征在于：所述表达系统含有如权利要求9所述构建体或基因组中整合有外源的如权利要求5至8任意一项所述多核苷酸。

11.一种用途，其特征在于：如权利要求1至4任意一项所述融合蛋白和如权利要求5至8任意一项所述多核苷酸和如权利要求9所述构建体或如权利要求10所述表达系统在基因编辑中的用途，所述基因编辑是将碱基A转换为G。

12.一种碱基编辑体系，其特征在于：包括如权利要求1至4任意一项所述融合蛋白和sgRNA。

13.一种基因编辑方法，其特征在于：包括如权利要求1至4任意一项融合蛋白或如权利要求12所述碱基编辑体系进行基因编辑，所述基因编辑是将碱基A转换为G。