[发明专利]样品处理方法和硝基呋喃类代谢物的测定方法

说明书

本申请涉及生化分析技术领域，尤其涉及一种样品处理方法和硝基呋喃类代谢物的测定方法。本申请的样品处理方法包括如下步骤：将用于硝基呋喃类代谢物测定的初始样品和衍生化试剂混合在酸性条件下进行衍生化处理，得到衍生后样品；将衍生后样品与聚乙二醇烷基苯基醚混合在碱性条件下进行浊点萃取处理，得到胶束相溶液；将胶束相溶液用缓冲液稀释后过滤处理，得到待测样品溶液。本申请的样品处理方法不仅工艺简单，而且可以有效分离硝基呋喃类代谢物，从而为硝基呋喃类代谢物含量的测定提供了很好的待测样品溶液，而且该过程不使用有毒溶剂，具有经济、安全、高效、简便、省时、环保的特点，因此具有很好的应用前景。

技术领域

本申请属于生化分析技术领域，尤其涉及一种样品处理方法和硝基呋喃类代谢物的测定方法。

背景技术

硝基呋喃类化合物(Nitrofurans)是一类合成的广谱抗生素，其基本结构为5-硝基呋喃，包括呋喃唑酮(furazolidone)、呋喃它酮(furaltadone)、呋喃妥因(nitrofurantoin)、呋喃西林(nitrofurazone)等。硝基呋喃类化合物通常用于治疗和预防由沙门氏菌和大肠杆菌感染引起的猪、鱼和家禽的消化系统感染，这些药物的半衰期很短，可以在动物体内迅速代谢，与蛋白质结合的代谢物可以产生稳定的残基。呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃西林对应的代谢物分别为：3-氨基-2-恶唑烷酮(3-Amino-2-Oxazolidinone，AOZ)、5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮(5-morpholine-methyl-3-amino-2-oxazolidinone，AMOZ)、1-氨基-2-乙内酰脲(1-Aminohydantoin hydrochloride，AHD)、氨基脲(Semicarbazide，SEM)。

目前，浊点萃取技术在分析化学、食品和痕量金属元素分析等研究中广泛应用，从而得到国内外科研学者的广泛关注。浊点萃取的条件温和，可以处理很多对热不稳定的有机大分子物质和挥发性有机物。浊点萃取是从双水相萃取发展而来的，浊点萃取主要是运用表面活性剂的两个重要功能：增溶作用和浊点现象，在温度降低时，表面活性剂易溶于水成为澄清的溶液，而当温度升高一定程度时，溶解度反而减小，会在水溶液中出现混浊、析出、分层的现象，因此，利用此现象萃取的方法称为浊点萃取法(CPE法)。

硝基呋喃类代谢物残留测定方法有高效液相色谱法、液相色谱-串联质谱法和酶联免疫法等。这些方法检测时间长，仪器体积大，不适合带到现场检测。此外，免疫胶体金快速检测试剂盒符合快速检测要求，具有检测时间短、灵敏度高、携带方便等优点。硝基呋喃类代谢物测定主要是针对生鲜和水产类产品，都是需要对待测样品进行前处理，对于富含脂质基质的食品鱼类等，就要利用正己烷去除脂肪。但是，目前样品处理方法步骤复杂、分离效果不佳，使得硝基呋喃类代谢物的测定效果有待提高。

发明内容

本申请的目的在于提供一种样品处理方法和硝基呋喃类代谢物的测定方法，旨在解决如简单、有效地从样品中分离硝基呋喃类代谢物，从而进行检测的技术问题。

为实现上述申请目的，本申请采用的技术方案如下：

第一方面，本申请提供一种样品处理方法，包括如下步骤：

将用于硝基呋喃类代谢物测定的初始样品和衍生化试剂混合在酸性条件下进行衍生化处理，得到衍生后样品；其中，所述衍生化试剂选自2,3-二氯-5,6-二氰对苯醌，所述衍生化处理中用盐酸调节酸性，所述衍生化处理的温度为58～62℃，时间为50～70min；

将所述衍生后样品与质量浓度为2.8～3.2％的曲拉通Triton X-114混合在pH＝7.0～7.5的碱性条件下进行浊点萃取处理，得到胶束相溶液；所述浊点萃取处理的温度为38～42℃，时间为5～15min；

将所述胶束相溶液用缓冲液稀释后过滤处理，得到待测样品溶液。

进一步地，将所述衍生后样品与曲拉通Triton X-114混合的步骤中，还加入了氯化钠。