[发明专利]用于在液体活检中准确诊断疾病靶向生物标记的方法

权利要求书

1.一种嵌入有双水相系统的组分的多孔材料的装置在纯化和浓缩靶向生物标记中的用途，其中所述靶向生物标记选自由以下组成的群组：甲胎蛋白AFP、癌抗原CA15-3和游离DNA。

2.根据权利要求1所述的用途，其中所述装置用于执行方法，包括以下步骤：

(a)提供包含所述靶向生物标记的样本溶液；

(b)提供所述嵌入有双水相系统的组分的多孔材料，其中当水溶液行进通过所述多孔材料时所述组分形成两相溶液，从而使得一相溶液比另一相溶液行进得更快；

(c)允许所述多孔材料芯吸所述样本溶液，其中所述样本溶液中的所述靶向生物标记分配到较快移动的相溶液中并在所述较快移动的相溶液的前部浓缩；

(d)将洗涤缓冲液施加在所述双水相系统上，从而从所述多孔材料中洗去杂质，其中所述靶向生物标记保留在所述多孔材料上；

(e)干燥并储存含有所述靶向生物标记的所述多孔材料；

(f)使用洗脱缓冲液从所述较快移动的相溶液的前部洗脱所述靶向生物标记，得到含有所述靶向生物标记的最终溶液；以及

(g)使所述最终溶液经受用于检测或量化所述靶向生物标记的诊断测定。

3.根据权利要求1所述的用途，其中所述靶向生物标记的浓度比所述样本溶液中的所述靶向生物标记的浓度高至少50倍。

4.根据权利要求1所述的用途，其中所述多孔材料选自由以下组成的群组：玻璃纤维纸、棉基纸、单层基质纸和聚烯烃泡沫垫。

5.根据权利要求1所述的用途，其中所述双水相系统的组分选自聚合物、盐和表面活性剂。

6.根据权利要求5所述的用途，其中所述聚合物选自由以下组成的群组：聚亚烷基二醇、聚(氧化烯)聚合物、聚(氧化烯)共聚物、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚乙烯己内酰胺、聚乙烯基甲基醚、烷氧基化表面活性剂、烷氧基化淀粉、烷氧基化纤维素、烷基羟烷基纤维素、有机硅改性聚醚、聚N-异丙基丙烯酰胺、聚乙二醇、聚丙二醇和葡聚糖。

7.根据权利要求5所述的用途，其中所述盐选自由以下组成的群组：Kosmotropic盐，离液盐，具有三甲基铵、三乙基铵、三丙基铵、三丁基铵、四甲基铵、四乙基铵、四丙基铵或四丁基铵的阳离子和磷酸盐、硫酸盐、硝酸盐、氯化物或碳酸氢盐、NaCl、Na₃PO4、K₃PO4、Na₂SO4、柠檬酸钾、(NH₄)₂SO₄、柠檬酸钠、乙酸钠、乙酸铵的阴离子的无机盐，以及它们的任何组合。

8.根据权利要求5所述的用途，其中所述表面活性剂选自由以下组成的群组：非离子表面活性剂、洗涤剂、Triton-X、IgepalCA-630和Nonidet P-40。

9.根据权利要求2所述的用途，其中所述样本溶液包含血液、血浆、血清、尿液、唾液、粪便物和身体排泄物中的一种或多种。

10.根据权利要求1所述的用途，其中所述游离DNA是循环肿瘤DNA。

11.根据权利要求1所述的用途，其中所述靶向生物标记浓缩高达100倍。

12.根据权利要求2所述的用途，其中所述诊断测定选自由以下组成的群组：酶联免疫吸附测定、聚合酶链反应、放射性免疫测定、基于蛋白质组的方法、印迹程序、免疫测定法、酶学测定和GC/MS。

13.根据权利要求1所述的用途，其中所述双水相系统的组分包括聚乙二醇、SDS、Triton-X114和Na₂SO₄。

14.根据权利要求13所述的用途，其中所述聚乙二醇为PEG 4600。

15.根据权利要求1所述的用途，其中所述双水相系统的组分包括20％(w/w)的PEG4600、2％(w/w)的SDS、16％(w/w)的Triton-X114和18.5％(w/w)的Na₂SO₄。