[发明专利]一种micorRNA206抑制HCV增殖的建立方法

说明书

本发明属于基因工程技术领域，公开了一种micorRNA206抑制HCV增殖的建立方法，预先合成带有CY5基团的miR‑206模拟物，确定最佳感染复数与转染量，并通过激光共聚焦与qRT‑PCR分别检测miR‑206的转染效率以及表达量；验证HCV病毒感染12h后，过表达miR‑206对HCV病毒增殖的抑制作用。本发明提供miR‑206转染入细胞过表达，并通过荧光定量PCR检测miR‑206相对表达量，通过评估HCV的病毒载量及其蛋白表达量分析microRNA‑206的抑制效果。本发明建立了检测miR‑206抑制HCV增殖的检测方法。该方法的建立为生物药物抑制HCV增殖的检测提供了新方向。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，尤其涉及一种micorRNA206抑制HCV增殖的建立方法。

背景技术

目前，丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)感染是引起世界范围慢性病毒性肝病的主要病因之一，其引起的丙型肝炎最终可导致肝硬化甚至肝细胞癌。由于目前尚缺乏HCV的疫苗，且其具体的致病机制尚未被完全阐明。研究表明宿主因素与HCV的感染、致病过程及患者治疗效果有密切关系，因此对其进行研究将有助于HCV感染的预防和个体化治疗。

microRNA(miRNA)是一类内源性非编码小分子RNA，具有调控细胞分化、增殖、凋亡和代谢等多种生物学功能，同时参与感染性疾病、代谢性疾病及肿瘤等多种疾病的发生过程。miRNA通过结合靶标基因的非编码区来抑制mRNA的翻译过程或降解mRNA，进而调控转录后基因表达过程。近年来，越来越多的miRNA被证实与HCV的感染密切相关。

microRNA-206(miR-206)位于人类6号染色体上，在脊椎动物中高度保守。miR-206首次按在骨骼肌中被发现，并被认为是骨骼肌特异性表达microRNA。随后，在心脏、肺、脑和肝脏等组织中也发现miR-206的表达，并且参与到这些器官的生理和病理反应过程中。目前为止，miR-206已被证实与乳腺癌、结肠癌、横纹肌肉瘤等肿瘤的发生具有相关性。最近发现在肝细胞癌的患者中miR-206的表达量明显低于正常人，并且其表达量与肝癌细胞的分化程度、癌细胞的结节数量、淋巴结转移以及肝癌的进展等相关，体外实验证实miR-206可以减少肝癌细胞的增殖、浸润和转移速度，并能加速其凋亡，但是具体的致病机制尚未完全阐明。目前对于miR-206与肝细胞癌的研究较少，部分研究证实miR-206在肝组织代谢过程中发挥重要作用，但尚未见miR-206与HCV复制增殖的相关报道。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：

(1)由于目前尚缺乏HCV的疫苗，且其具体的致病机制尚未被完全阐明。

(2)尚未见miR-206与HCV复制增殖的相关报道，其可能是潜在的HCV治疗药物。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种micorRNA206抑制HCV增殖的实验方法及检测方法。

本发明所述micorRNA206抑制HCV增殖方法和检测方法的建立包括：

miR-206转染入HCV感染的细胞过表达，通过荧光定量PCR检测miR-206相对表达量，并通过评估HCV的病毒载量及蛋白表达量分析microRNA-206的抑制效果。

进一步，所述micorRNA206抑制HCV增殖的建立方法还包括：

预先合成带有CY5基团的miR-206模拟物，确定最佳感染复数与转染量，并通过激光共聚焦与qRT-PCR分别检测miR-206的转染效率以及表达量；验证HCV病毒感染12h后，过表达miR-206对HCV病毒增殖的抑制作用。

进一步，所述HCV病毒载量检测引物序列为SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2，探针序列为SEQ ID NO：3。