[发明专利]一种耐草铵膦转基因玉米BrmB01的制备与检测方法及其应用

权利要求书

1.一种耐草铵膦转基因玉米的培育方法，包括如下步骤：将外源DNA分子插入目的玉米基因组中，得到耐草铵膦转基因玉米；

所述外源DNA分子为含有草丁膦乙酰CoA转移酶编码基因的DNA分子；

所述外源DNA分子在所述耐草铵膦转基因玉米中的上游侧翼序列为上游插入位点起向其上游方向延伸得到的任意一个DNA片段；

所述外源DNA分子在所述耐草铵膦转基因玉米中的下游侧翼序列为下游插入位点起向其下游方向延伸得到的任意一个DNA片段；

所述上游插入位点为玉米基因组中含有的SEQ ID No.1第1-516位所示的DNA分子中的最后一个核苷酸对应的位点；

所述下游插入位点为玉米基因组中含有的SEQ ID No.1第2664-3034位所示的DNA分子中的第一个核苷酸对应的位点。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述耐草铵膦转基因玉米含有特异DNA片段；

或，所述特异DNA片段含有SEQ ID No.2所示的DNA分子和/或SEQ ID No.3所示的DNA分子；

或，所述特异DNA片段含有SEQ ID No.4所示的DNA分子和/或SEQ ID No.5所示的DNA分子；

或，所述特异DNA片段依次由所述上游侧翼序列、所述外源DNA分子和所述下游侧翼序列组成；

或，所述外源DNA分子如SEQ ID No.1第517-2663位所示；

或，所述上游侧翼序列如SEQ ID No.1第1-516位所示；

或，所述下游侧翼序列如SEQ ID No.1第2664-3034位所示；

或，所述特异DNA片段如SEQ ID No.1所示；

或，所述耐草铵膦转基因玉米为转基因玉米事件BrmB01 CGMCC No.22650。

3.一种耐草铵膦转基因玉米的培育方法，包括如下步骤：以按照权利要求1或2所述方法培育的耐草铵膦转基因玉米或其后代为亲本材料与其它不具有草铵膦耐受性的玉米品种进行杂交，得到耐草铵膦转基因玉米；所述耐草铵膦转基因玉米含有权利要求2中所述的特异DNA片段。

4.如下1)-4)任一所述的生物材料：

1)权利要求1或2中所述的上游侧翼序列；

2)权利要求1或2中所述的下游侧翼序列；

3)权利要求1或2中所述的外源DNA分子；

4)权利要求1或2中所述的特异DNA片段。

5.权利要求4所述的生物材料在如下a1)或a2)任一种中的应用：

a1)培育权利要求1-3中任一所述的耐草铵膦转基因玉米；

a2)检测或辅助检测植物样品是否来源于权利要求1-3中任一所述的耐草铵膦转基因玉米或其后代。

6.用于检测或辅助检测植物样品是否来源于权利要求1-3中任一所述的耐草铵膦转基因玉米或其后代的方法，包括如下步骤：检测所述植物样品的基因组DNA中是否含有权利要求2中所述的特异DNA片段，若含有所述特异DNA片段，则所述植物样品来源于所述耐草铵膦转基因玉米或其后代。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：检测所述植物样品的基因组DNA中是否含有权利要求2中所述的特异DNA片段的方法为如下b1)或b2)或b3)：

b1)直接测序所述植物样品的基因组DNA，根据测序结果判断所述植物样品中是否含有所述特异DNA片段；

b2)采用引物对1和/或引物对2对所述植物样品的基因组DNA进行PCR扩增，若有目的扩增产物，则所述植物样品含有所述特异DNA片段；

所述引物对1为扩增产物含有DNA片段甲的引物对；所述DNA片段甲如SEQ ID No.2；

所述引物对2为扩增产物含有DNA片段乙的引物对；所述DNA片段乙如SEQ ID No.3；

b3)用能特异结合所述特异DNA片段的探针对所述植物样品的基因组DNA进行Southern杂交，若能杂交得到杂交片段，则所述植物样品含有所述特异DNA片段。