[发明专利]一种大肠杆菌重组核酸、重组大肠杆菌及培养方法和生物合成L-苏氨酸的方法

权利要求书

1.一种大肠杆菌重组核酸，其特征在于，所述重组核酸包括磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶pck的编码基因、丙酮酸羧化酶pyc的编码基因和苏氨酸操纵子的编码基因。

2.根据权利要求1所述重组核酸，其特征在于，所述磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶pck的编码基因、丙酮酸羧化酶pyc的编码基因和苏氨酸操纵子的编码基因均由Trc启动子启动表达。

3.根据权利要求1所述重组核酸，其特征在于，所述磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶pck的编码基因来源于枯草芽孢杆菌；

所述丙酮酸羧化酶pyc的编码基因来源于地衣芽孢杆菌。

4.根据权利要求1或3所述重组核酸，其特征在于，所述磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶pck经RBS优化和143位甘氨酸突变为精氨酸；

所述丙酮酸羧化酶pyc经RBS优化和247位丙氨酸突变为赖氨酸。

5.根据权利要求1所述重组核酸，其特征在于，所述苏氨酸操纵子经RBS优化和144位丙氨酸突变为天冬氨酸。

6.一种包含权利要求1～5任一项所述重组核酸的重组大肠杆菌，所述重组大肠杆菌过表达磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶pck、丙酮酸羧化酶pyc和苏氨酸操纵子。

7.根据权利要求6所述重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌的基础菌株包括大肠杆菌K-12 W3110。

8.权利要求6或7所述重组大肠杆菌的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：将所述重组大肠杆菌接种于种子培养基上进行培养，得种子液；所述种子培养基包括以下浓度的组分：玉米浆干粉5g/L，葡萄糖20g/L，酵母粉5g/L，KH₂PO₄ 2g/L，硫酸镁1g/L，FeSO₄·7H₂O20mg/L和MnSO4·H₂O 20mg/L。

9.权利要求6或7所述重组大肠杆菌在生物合成L-苏氨酸中的应用，所述重组大肠杆菌以葡萄糖为发酵底物。

10.一种生物合成L-苏氨酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：将利用权利要求8所述培养方法得到的种子液接种于发酵培养基中，进行有氧发酵，发酵液中含L-苏氨酸；

所述发酵培养基包括以下浓度的组分：葡萄糖20g/L，磷酸二氢钾2g/L，酵母粉3g/L，甜菜碱1g/L，硫酸镁1g/L，FeSO₄·7H₂O 10mg/L，MnSO₄·H₂O 10mg/L，玉米浆干粉8g/L和维生素B1 10mg/L。