[发明专利]具有提高的热稳定性的T4 DNA连接酶变体有效
申请号: | 202210557709.6 | 申请日: | 2022-05-19 |
公开(公告)号: | CN114854699B | 公开(公告)日: | 2023-02-28 |
发明(设计)人: | 朱振宇;孙大鹏 | 申请(专利权)人: | 武汉爱博泰克生物科技有限公司 |
主分类号: | C12N9/00 | 分类号: | C12N9/00;C12N15/52;C12P19/34 |
代理公司: | 北京市中伦律师事务所 11410 | 代理人: | 刘烽 |
地址: | 430000 湖北省武汉市东湖新技术开发区高新二*** | 国省代码: | 湖北;42 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 具有 提高 热稳定性 t4 dna 连接酶 变体 | ||
1.一种突变型T4 DNA连接酶,其氨基酸序列如SEQ ID NO:32或SEQ ID NO:34所示;且不包括在其C-末端处的6-元组氨酸标签和6个紧接在前的甘氨酸和丝氨酸氨基酸。
2.一种多核苷酸,其编码如权利要求1所述的突变型T4 DNA连接酶之一的氨基酸序列。
3.一种载体,其掺入有如权利要求2所述的多核苷酸。
4.一种细胞,其用如权利要求2所述的多核苷酸转化并表达所述多核苷酸。
5.一种在不同多核苷酸之间进行多核苷酸连接或通过连接多核苷酸的5'端和3'端来进行多核苷酸连接以产生环状多核苷酸的方法,其中所述多核苷酸具有平末端或粘性末端,所述方法包括:
提供连接混合物,其包含待连接的多核苷酸和如权利要求1所述的突变型T4 DNA连接酶;和
为所述连接混合物提供大于37℃且小于等于44.6℃的反应温度。
6.如权利要求5所述的方法,其中所述反应温度大于42℃。
7.如权利要求5所述的方法,其中所述连接混合物包含Tris-HCl、MgCl2、ATP、二硫苏糖醇和水。
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