[发明专利]一种黄鳝胚胎保存液及其保存方法

说明书

本发明提供了一种黄鳝胚胎保存液及其保存方法，属于鱼类生物技术领域。一种黄鳝胚胎保存液，包括含7.3～7.4g/L氯化钠、0.28～0.32g/L氯化钾、4.0～4.2g/L十二水和磷酸氢二钠、0.25～0.35g/L磷酸二氢钾和38～42g/L多聚甲醛的溶液I和含6.7～6.8g/L氯化钠、0.25～0.35g/L氯化钾、3.5～3.9g/L十二水和磷酸氢二钠、0.25～0.30g/L磷酸二氢钾和38～42g/L多聚甲醛的溶液II。用溶液I浸泡单细胞期‑肌肉效应期胚胎，用溶液II浸泡肌肉效应期‑出壳期胚胎，可使黄鳝胚胎不变型、卵黄不破裂，可用显微镜直观观察黄鳝胚胎发育状态或者用于胚胎原位杂交等试验。

技术领域

本发明属于鱼类生物技术领域，具体涉及一种黄鳝胚胎保存液及其保存方法。

背景技术

黄鳝(Monopterus albus)是一种典型的性逆转生物，出生为雌性，待产卵后逐渐转变为雄性，极具科研价值。黄鳝卵颗粒较大，受精卵直径为2-3毫米，卵黄物质较多。目前，人们常常通过对黄鳝胚胎进行保存，以便在显微镜下观察黄鳝胚胎的形态，来达到人们对黄鳝胚胎不同发育时期的形态特征研究的目的。

目前，黄鳝胚胎常采用PBS溶液进行保存，长期保存的黄鳝胚胎容易发生变型，卵黄破裂等现象，影响黄鳝胚胎后续正常发育和存活，不能满足黄鳝胚胎长期保存的要求。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种黄鳝胚胎保存液及其保存方法，使保存的黄鳝胚胎不变型、卵黄不破裂，利用显微镜直观观察黄鳝胚胎发育状态或者用于胚胎原位杂交等研究。

本发明提供了一种黄鳝胚胎保存液，包括独立分装的溶液I和溶液II；

所述溶液I是包含以下成分的水溶液：7.3～7.4g/L氯化钠、0.28～0.32g/L氯化钾、4.0～4.2g/LNa₂HPO₄·12H₂O、0.25～0.35g/L磷酸二氢钾和38～42g/L多聚甲醛；

所述溶液II是包含以下成分的水溶液：6.7～6.8g/L氯化钠、0.25～0.35g/L氯化钾、3.5～3.9g/LNa₂HPO₄·12H₂O、0.25～0.30g/L磷酸二氢钾和38～42g/L多聚甲醛。

优选的，所述溶液I是包含以下成分的水溶液：7.5g/L氯化钠、0.3g/L氯化钾、4.1g/LNa₂HPO₄·12H₂O、0.3g/L磷酸二氢钾和40g/L多聚甲醛；

所述溶液II是包含以下成分的水溶液：6.75g/L氯化钠、0.27g/L氯化钾、3.7g/LNa₂HPO₄·12H₂O、0.27g/L磷酸二氢钾和40g/L多聚甲醛。

本发明提供了所述黄鳝胚胎保存液在黄鳝胚胎保存中的应用。

本发明提供了一种黄鳝胚胎保存方法，包括以下步骤：

用所述黄鳝胚胎保存液的溶液I浸泡处于单细胞期-肌肉效应期的黄鳝胚胎，用所述黄鳝胚胎保存液的溶液II浸泡处于肌肉效应期-出壳期的黄鳝胚胎，将浸泡后的黄鳝胚胎进行保存。

优选的，所述浸泡的温度为20～28℃。

优选的，所述浸泡的时间为25～40min。

优选的，所述浸泡的次数包括2～4次。

优选的，所述浸泡的次数包括3次。

优选的，所述浸泡时，每毫升所述溶液I或溶液II浸泡1个黄鳝胚胎。

优选的，所述保存的温度为3～5℃。