[发明专利]一种沼泽红假单胞菌快速培养方法和培养基

说明书

本发明涉及微生物培养技术领域，具体涉及一种沼泽红假单胞菌快速培养方法和培养基。本发明提供用于沼泽红假单胞菌有氧培养的培养基，其包括如下组分：有机氮源3.00～9.00g/L，铵盐0.88～1.76g/L，丁二酸钠5.40～10.80g/L，谷氨酸钠1.12～2.25g/L，硫酸镁0.20～0.60g/L。利用该培养基和有氧培养方法，沼泽红假单胞菌可进行快速增殖，具有较高的生长速率，可在短时间内获得较多的沼泽红假单胞菌菌体，获得的菌体经一步简单处理后，即可满足沼泽红假单胞菌厌氧发酵的需求，极大地简化了培养过程，缩短了培养周期。

技术领域

本发明涉及微生物培养技术领域，具体涉及一种沼泽红假单胞菌快速培养方法和培养基。

背景技术

沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)是一种常见的兼性好氧细菌，属于红螺菌科，红假单胞菌属。在厌氧条件下，沼泽红假单胞菌能够利用光照供能，以有机物、硫化物、氨等作为氢供体进行繁殖；同时，该菌也能在有氧条件下利用有机物等进行快速繁殖。沼泽红假单胞菌广泛分布在自然界的土壤、水体等环境中，在具有多种代谢途径的同时，可以分泌多种有益物质，在农牧业、废水处理、水产养殖等方面具有广泛的应用前景。沼泽红假单胞菌可以作为动物养殖过程中的饲料添加剂使用。

目前，常见的沼泽红假单胞菌的人工培养多为厌氧光照培养过程，即使用透光的培养容器进行密闭培养，在厌氧条件下经过4～7天的培养周期，最终获得沼泽红假单胞菌培养液。上述培养方法对于培养容器和培养条件有严格的限制，并且生长速率、发酵速率受到厌氧培养影响较为缓慢，所需培养周期较长，获得的菌体量较低。

发明内容

本发明的目的是提供一种沼泽红假单胞菌快速培养方法和培养基。

针对目前厌氧培养沼泽红假单胞菌存在的问题，本发明开发一种沼泽红假单胞菌快速培养方法及其使用的培养基。本发明采用有氧培养方法并首先优化了有氧培养使用的培养基以提高沼泽红假单胞菌的增殖速率，缩短培养周期。本发明在研发过程中尝试了多种碳源、氮源等营养物质及其不同的组合，发现很多培养基虽然能够保证较高的最终菌体量，但是，沼泽红假单胞菌的生长速率仍然较慢，需要较长的培养时间，同时也增加了杂菌污染的风险。经大量尝试本发明意外地发现，在培养基中添加特定配比的丁二酸钠和谷氨酸钠能够显著提高沼泽红假单胞菌在有氧条件下的生长速率，同时显著增加培养获得的最终菌体量。

具体地，本发明提供以下技术方案：

本发明提供用于沼泽红假单胞菌有氧培养的培养基，所述培养基包括如下组分：有机氮源3.00～9.00g/L，铵盐0.88～1.76g/L，丁二酸钠5.40～10.80g/L，谷氨酸钠1.12～2.25g/L，硫酸镁0.20～0.60g/L。

优选地，所述培养基中，丁二酸钠和谷氨酸钠的质量比为(4～6)：1。

沼泽红假单胞菌对于碳源和氮源等营养物质的代谢存在复杂的代谢途径和调控机制，本发明发现，将丁二酸钠和谷氨酸钠以上述配比添加，能够明显促进沼泽红假单胞菌在有氧条件下的生长，有利于在短时间有氧培养下获得较高的菌体量。

在本发明的一些实施方式中，有氧培养的培养基中，丁二酸钠和谷氨酸钠的质量比为(4～5)：1。

在添加上述配比的丁二酸和谷氨酸钠的基础上，有机氮源优选为酵母膏和蛋白胨。有机氮源与丁二酸钠和谷氨酸钠的总质量之比优选为1：(1～2)。更优选为1：(1.5～2)。

采用上述配比的酵母膏和蛋白胨与丁二酸钠和谷氨酸钠配合，能够更好地促进沼泽红假单胞菌在有氧条件下快速增殖。

优选地，所述培养基中，酵母膏的浓度为2.00～6.00g/L，蛋白胨的浓度为2.00～6.00g/L。

作为无机氮源，铵盐为选自硫酸铵、氯化铵中的一种或两种。