[发明专利]动脉粥样硬化斑块的免疫细胞治疗剂及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种动脉粥样硬化斑块的免疫细胞治疗剂，其特征在于，所述免疫细胞治疗剂以单核巨噬细胞为基础，以“膜修饰材料”CD47p、纳米辅助中间载体GQDs以及基因药物miRNA223交联而成的体系CD47p-GQDs-miRNA223为工具，利用细胞表面纳米工程化技术构建得到的M-CD47p-GQDs-miRNA223；

所述CD47p为具有CD47 IgV结构域的衍生肽；所述GQDs为氨基化的石墨烯量子点。

2.根据权利要求1所述的免疫细胞治疗剂，其特征在于，所述CD47p的序列为P-GK^DL^DE^DI^DV^DT^DK^DGE^D R^DS^DL^D E^DT^D V^DE^DC^DT^DY^DN^DG；其中，P为棕榈酸。

3.根据权利要求1所述的免疫细胞治疗剂，其特征在于，所述CD47p用Rhodamine B进行荧光修饰，所述miRNA223为5’巯基修饰同时3’FAM荧光修饰。

4.根据权利要求1-3任一所述的免疫细胞治疗剂，其特征在于，所述单核巨噬细胞为RAW264.7。

5.权利要求1-5任一所述动脉粥样硬化斑块的免疫细胞治疗剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺、N-羟基丁二酰亚胺依次加入已溶解的CD47p溶液中，调节pH至6.0后室温搅拌30min，得到羧基活化的CD47p溶液，记为溶液A；

(2)向溶液A中加入已调节pH7.44的氨基化GQDs溶液，室温下搅拌24h，透析，得到CD47p-GQDs交联溶液，再向交联溶液中加入6-(3'-(2-吡啶基二硫代)丙酰氨基)已酸酯，并在室温下搅拌反应1h，超滤离心后得到CD47p-GQDs-S-S-溶液，记为溶液C；

(3)取巯基化miRNA223溶液添加到溶液C稀释液中，置于4℃冰箱并且保持避光反应一夜，得到CD47p-GQDs-miRNA223溶液，记为溶液D；

(4)将溶液D与RAW264.7单核巨噬细胞共孵育，得到动脉粥样硬化斑块的免疫细胞治疗剂M-CD47p-GQDs-miRNA223；

所述室温为20～25℃。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述CD47p溶液浓度为1mg/mL，且所述1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺、所述N-羟基丁二酰亚胺与所述CD47p的质量比为2：1：20。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述氨基化GQDs溶液浓度为0.1mg/mL，且所述氨基化GQDs溶液与所述溶液A的体积比为1:1；

步骤(2)所述6-(3'-(2-吡啶基二硫代)丙酰氨基)已酸酯的添加量为2.5mg。

8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述透析的截留分子量为1kDa，所述超滤离心的截留分子量为100kDa。

9.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述巯基化miRNA223溶液的浓度为20μM，所述溶液C稀释液稀释倍数为10倍，且巯基化miRNA223溶液与所述溶液C稀释液的体积比为1：50。

10.权利要求1-4任意所述免疫细胞治疗剂或权利要求5-9任一所述制备方法制备的产品在制备动脉粥样硬化斑块的免疫细胞治疗剂药品中的应用。