[发明专利]结核分枝杆菌LTBI-RD相关蛋白抗原的CTL表位肽及其应用

说明书

本发明公开了结核分枝杆菌LTBI‑RD相关蛋白抗原的CTL表位肽及其应用。具体地公开了10条CTL表位肽的氨基酸序列及其在活动性结核和潜伏性结核感染的鉴别诊断中的应用。本发明的CTL表位肽能够刺激ATB、LTBI以及UC组小鼠模型产生免疫应答，使得IFN‑γ⁺T淋巴细胞的绝对计数水平以及Th1/Th2/Th9/Th17/Th22/Treg相关细胞因子分泌水平在三组间存在显著差异，能够较好地在鉴别诊断ATB和LTBI。用上述CTL表位肽作为ATB和LTBI诊断标志物，与传统检测技术TST和IGRAs相比，具有制备方法简单、成本低、产量高、灵敏度和特异性更高等优点。

技术领域

本发明属于免疫学领域，涉及结核分枝杆菌LTBI-RD相关蛋白抗原的CTL表位肽及其应用。具体涉及源自于LTBI-RD相关抗原的CTL表位肽在结核分枝杆菌 (Mycobacteriumtuberculosis)所致活动性结核和潜伏性结核感染的鉴别诊断中的应用。

背景技术

结核病(Tuberculosis，TB)是结核分枝杆菌(Mycobacteria tuberculosis，MTB)引起的慢性传染病，可侵及多个脏器，以肺部受累形成肺结核最为常见，已成为人类十大主要传染病之一。研究表明，世界上大约26％的人口感染了结核病，其中只有10％的人患上了活动性结核病(Active tuberculosis，ATB)，这意味着近90％的人是潜伏性结核病感染(Latent tuberculosis infection，LTBI)。LTBI是一种特殊状态，即个体已感染结核分枝杆菌，但尚未发展为活动性结核(ATB)，其特征是结核菌素皮肤试验 (Tuberculin SkinTest，TST)阳性，无ATB的临床表现和影像学改变。据估计，LTBI 患者在没有及时诊断和干预的情况下发生ATB的终生风险为5-10％，如果他们同时感染人类免疫缺陷病毒(HIV)，这种风险每年可能高达10％，远高于HIV阴性人群。流行病学调查显示，约85％-90％的新发活动性结核由LTBI发展而来。因此，早期发现和诊断LTBI患者是控制结核病传播的基础。

TST是长期以来快速诊断结核杆菌潜在感染的唯一手段，但该方法特异性较低，给结核病的诊断带来很大困难。传统TST检测中使用的抗原是旧结核菌素(Old tuberculin，OT)或纯化蛋白衍生物(Purified protein derivative，PPD)，其与卡介苗(BCG) 及其他分枝杆菌有着部分共同抗原而存在交叉反应，因此导致接种卡介苗的人群假阳性率高，并且无法区分LTBI和ATB患者。最近，一些新的TST检测方法被开发出来，例如Diaskin试验、C-Tb皮肤试验和EC(重组结核杆菌融合蛋白)试验，它们用结核分枝杆菌强毒株的早期分泌抗原靶标6(Early secretory antigenic target-6，ESAT-6)和培养滤液蛋白10(Culturefiltrate protein10，CFP-10)抗原取代了传统的PPD。随着免疫学技术的发展，建立了基于体外干扰素γ释放分析(IFN-γrelease assay，IGRA)诊断结核病的方法，该方法是通过检测人外周血中T淋巴细胞经结核特异性抗原刺激后所产生的IFN-γ的量来判定结核杆菌感染情况，较TST方法具有更强的特异性和更高的灵敏度，目前已经开发了五种商业化IGRA试剂盒来克服传统TST的缺陷，例如结核检测的T细胞斑点实验(T-spot.TB)、QuantiFERON TBGold In Tube(QFT-GIT)、QuantiFERON TB Gold Plus(QFT Plus)、LIAISON QuantiFERON-TB Gold Plus (LIAISON QFT-Plus)，以及LIOFeron TB/LTBI。巧合的是，这些改进的TST方法和最新的IGRAs技术均采用了ESAT-6和CFP-10作为刺激抗原。这两种抗原在卡介苗株和大多数非结核分枝杆菌(Nontuberculous mycobacteria，NTM)中都不存在，因此不容易产生交叉反应，可以消除卡介苗(BCG)接种对结核诊断的影响。虽然在检测 MTB感染时可应用IGRA方法，但其敏感性与特异性仍缺少严格的“金标准”，且费用高昂、IGRA检测阳性也无法区分LTBI和ATB。