[发明专利]一种碱性蛋白酶SP4及其突变体、编码基因和应用有效
| 申请号： | 202210570089.X | 申请日： | 2022-05-24 |
| 公开（公告）号： | CN114958813B | 公开（公告）日： | 2023-08-04 |
| 发明（设计）人： | 罗会颖;王宵;王克芬;刘金巍;张杰;钱娟娟;王兴吉;刘文龙 | 申请（专利权）人： | 山东隆科特酶制剂有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/58 | 分类号： | C12N9/58;C12N15/57;C12N15/81;C12N1/19;C11D3/386;C12R1/84 |
| 代理公司： | 北京法信智言知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11737 | 代理人： | 尹超群 |
| 地址： | 276400 山东省*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 碱性 蛋白酶 sp4 及其 突变体 编码 基因 应用 | ||
1.一种比活和催化效率提高的蛋白酶突变体SP4-M1，其特征在于，所述突变体通过对氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示的碱性蛋白酶进行Q178N、D250S和 A251S定点突变而得；
所述突变体通过将氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示的碱性蛋白酶去除N端前15个氨基酸后进行Q163N、 D235S和A236S定点突变而得；或者
所述突变体通过对氨基酸序列如SEQ ID NO：2的碱性蛋白酶进行Q70N、D142S和A143S定点突变而得。
2.一种碱性蛋白酶基因，其特征在于，编码权利要求1所述的比活和催化效率提高的蛋白酶突变体SP4-M1。
3.根据权利要求2所述的碱性蛋白酶基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示。
4.包含权利要求2所述碱性蛋白酶基因的重组表达载体。
5.包含权利要求2所述碱性蛋白酶基因的重组菌株。
6.一种制备碱性蛋白酶的方法，其特征在于，所述包括以下步骤：
（1）以权利要求4所述的重组表达载体转化宿主细胞；
（2）培养并诱导宿主细胞异源表达碱性蛋白酶；
（3）分离纯化获得碱性蛋白酶。
7.权利要求1所述的比活和催化效率提高的蛋白酶突变体SP4-M1的在制备洗涤剂中的应用。
8.一种提高蛋白酶的比活和催化效率的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：对氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示的碱性蛋白酶进行Q178N、 D250S和 A251S定点突变，或者去除N端前15个氨基酸后进行Q163N、D235S和A236S定点突变；
或者，
对氨基酸序列如SEQ ID NO：2的碱性蛋白酶进行Q70N、D142S和A143S定点突变。
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