[发明专利]一种牛病毒性腹泻病毒E0截短蛋白、制备方法及应用有效
| 申请号： | 202210571389.X | 申请日： | 2022-05-24 |
| 公开（公告）号： | CN114773438B | 公开（公告）日： | 2023-06-13 |
| 发明（设计）人： | 郑海学;茹毅;李亚军;郝荣增;杨洋;卢炳州;秦晓东;刘华南;张贵财;李丹;张越;陈娇;吴秀萍;赵东梅;任蕊芳 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院兰州兽医研究所 |
| 主分类号： | C07K14/18 | 分类号： | C07K14/18;C12N15/40;C12N15/85;C12N15/66;A61K39/12;A61P31/14;G01N33/68;G01N33/569 |
| 代理公司： | 北京力量专利代理事务所(特殊普通合伙) 11504 | 代理人： | 毛婷 |
| 地址： | 730046 *** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 种牛 病毒性 腹泻 病毒 e0 蛋白 制备 方法 应用 | ||
1.一种牛病毒性腹泻病毒E0截短蛋白，其特征在于，所述牛病毒性腹泻病毒E0截短蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.一种编码权利要求1所述牛病毒性腹泻病毒E0截短蛋白的基因，其特征在于，所述基因序列如SEQ ID NO.2所示。
3.如权利要求1所述的牛病毒性腹泻病毒E0截短蛋白，其特征在于，所述牛病毒性腹泻病毒E0截短蛋白的第160-162位氨基酸由IAA突变为GGG；所述突变后的牛病毒性腹泻病毒E0截短蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。
4.一种编码权利要求3所述牛病毒性腹泻病毒E0截短蛋白的基因，其特征在于，所述基因序列如SEQ ID NO.6所示。
5.如权利要求1或3所述的牛病毒性腹泻病毒E0截短蛋白在制备牛病毒性腹泻疫苗或牛病毒性腹泻诊断制剂中的应用。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述疫苗为亚单位疫苗。
7.如权利要求1或3所述牛病毒性腹泻病毒E0截短蛋白的制备方法，其特征在于，所述方法包括：将编码牛病毒性腹泻病毒E0截短蛋白的基因克隆到真核表达载体中得到表达牛病毒性腹泻病毒E0截短蛋白的重组质粒；再将所述的重组质粒转染至CHO细胞中，培养、筛选、纯化得到牛病毒性腹泻病毒E0截短蛋白。
8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述真核表达载体为pcDNA3.1载体。
9.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述CHO细胞为CHO悬浮细胞。
10.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述方法为：
(1)PCR扩增编码牛病毒性腹泻病毒E0截短蛋白的基因片段，所述基因片段如SEQ IDNO.2或SEQ ID NO.6所示；
(2)用限制性内切酶Xho I和Hind III分别对载体pcDNA3.1和牛病毒性腹泻病毒E0截短蛋白的基因片段进行双酶切，并将酶切片段和E0截短蛋白的基因片段用DNA连接酶连接，获得表达牛病毒性腹泻病毒E0截短蛋白的重组质粒pcDNA3.1-BVDV-tE0；
(3)将重组质粒pcDNA3.1-BVDV-tE0转染CHO悬浮细胞，悬浮培养，收集细胞培养上清，纯化即得牛病毒性腹泻病毒E0截短蛋白。
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