[发明专利]一种血液样本分离和冻存的方法在审
| 申请号： | 202210577606.6 | 申请日： | 2022-05-25 |
| 公开（公告）号： | CN114964966A | 公开（公告）日： | 2022-08-30 |
| 发明（设计）人： | 刘中民;赵庆辉;汤红明;许啸;黎李平 | 申请（专利权）人： | 上海市东方医院（同济大学附属东方医院） |
| 主分类号： | G01N1/28 | 分类号： | G01N1/28;G01N1/40;G01N1/42;A01N1/02 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 苏士莹 |
| 地址： | 200120 *** | 国省代码： | 上海;31 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 血液 样本 分离 方法 | ||
1.一种血液分离方法，其特征在于，包括如下步骤：
将待分离血液分别进行抗凝处理和促凝处理，得抗凝血和促凝血；
对部分抗凝血进行第一离心，得血浆、白膜层液体和少浆血；
将部分抗凝血与PBS和淋巴细胞分离液混合，第二离心获得单个核细胞；
对所述促凝血进行第三离心，得血清和血凝块。
2.根据权利要求1所述分离方法，其特征在于，所述第一离心的温度为4℃，转速为1200g，时间为10min。
3.根据权利要求1所述分离方法，其特征在于，提取所述单个核细胞时，所述抗凝血与PBS和淋巴细胞分离液的体积比为3:2:1。
4.根据权利要求1所述分离方法，其特征在于，所述第二离心包括升速1～2g，降速0～2g，600g离心20min后，抽取混合液中的白膜层，升速4～6g，降速1～3g，600g离心10min。
5.根据权利要求1所述分离方法，其特征在于，所述第三离心的转速为1600g，时间为10min。
6.一种血液样本冻存方法，其特征在于，包括如下步骤：
将权利要求1～5任一项所述分离方法得到的单个核细胞与冻存液混合，4℃保温10min后进行变温处理；
所述变温处理依次包括：以1℃/min的速率降温至-9℃，以50℃/min的速率降温至-50℃，以25℃/min的速率升温至-25℃，以1℃/min的速率降温至-50℃，以10℃/min的速率降温至-90℃；
将权利要求1～5任一项所述血液分离方法得到的血浆、白膜层液体、少浆血、血清层和凝血块层分别放入液氮中浸泡20～30s，-80℃冻存；
将剩余部分的抗凝血放入液氮中浸泡20～30s，-80℃冻存。
7.根据权利要求6所述的冻存方法，其特征在于，按照体积百分含量计，所述冻存液包括10％二甲基亚砜、70％基础培养基和20％血清。
8.根据权利要求6所述的冻存方法，其特征在于，按照体积百分含量计，所述冻存液包括70％基础培养基、20％血清、余量的二甲基亚砜和乙二醇。
9.根据权利要求8所述的冻存方法，其特征在于，所述二甲基亚砜和乙二醇的体积比为5～7：3～5。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于上海市东方医院（同济大学附属东方医院），未经上海市东方医院（同济大学附属东方医院）许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202210577606.6/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
