[发明专利]一种大豆低聚肽质量控制方法

说明书

本发明公开了一种大豆低聚肽质量控制方法，涉及低聚肽质量控制方法技术领域。本发明公开了一种大豆低聚肽质量控制方法，包括以下步骤：(1)配制多肽VV和多肽VN标准品溶液；(2)配制大豆低聚肽样品溶液；(3)用液相色谱对标准品溶液、大豆低聚肽样品溶液进行组分分离，得到盐性组分和非盐性组分；(4)对液相色谱分离的非盐性组分进行质谱定性和定量分析。本发明以多肽VV和多肽VN作为质量控制目标建立质控方法，可在分子层面直接、准确地描述低聚肽原料中已知低聚肽的变化情况，且这种基于已知低聚肽的质量控制方法大大提升了低聚肽原料的造假难度和生产稳定性质量控制技术水平。

技术领域

本发明涉及低聚肽质量控制方法技术领域，尤其是一种大豆低聚肽质量控制方法。

背景技术

现有技术对大豆低聚肽或者其他多肽原料的质量控制方法大多采用水解度、氨基酸、分子量分布等方式或方法，其中水解度主要通过电位滴定或pH滴定法测定样品中的游离氨基酸态总氮含量；氨基酸含量主要通过氨基酸色谱仪、液相色谱仪等测定样品中的各项氨基酸组成；分子量分布主要利用凝胶色谱的分子筛作用测定样品中的多肽大致分子量组成或分布情况。

食源性植物低聚肽是植物蛋白经过生物酶解或发酵处理后所得的一种富含低聚肽(2-10肽)的蛋白质酶解产物。因食源性蛋白酶大多为粗酶，纯度较低且酶作用位点广泛，食源性蛋白酶解产物的多肽组成通常极为复杂，包含成千上万种多肽，一直是质量分析与控制的难点。现有技术方案通过水解度、氨基酸、分子量分布来实现对大豆低聚肽的质量控制存在诸多不足之处。其中，水解度和氨基酸测定的直接对象为蛋白序列在酶解过程中产生的游离氨基酸总量及游离氨基酸组成，虽能在一定程度上间接描述酶解产物特征，但无法直接对产物形成准确描述，在生产实践中可简单通过添加氨基酸实现原料造假；分子量分布可在宏观上有效描述低聚肽的分子量组成特点，但由于其描述主要停留于宏观层面，对微观层面的描述不够，因而质量控制的效力不足，在生产实践中难以非常灵敏的反映低聚肽原料质量变化。

发明内容

基于此，本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种大豆低聚肽质量控制方法。

为实现上述目的，本发明所采取的技术方案为：一种大豆低聚肽质量控制方法，包括以下步骤：

(1)配制多肽VV和多肽VN标准品溶液；

(2)配制大豆低聚肽样品溶液；

(3)用液相色谱对标准品溶液、大豆低聚肽样品溶液进行组分分离，得到盐性组分和非盐性组分；

(4)对液相色谱分离的非盐性组分进行质谱定性和定量分析。

本发明提供了一种大豆低聚肽质量控制方法，主要是基于两种二肽(多肽序列为Val-Val和Val-Asn)，采用液质联用分析技术，结合MRM多反应离子检测方法对大豆低聚肽原料实行分子层面的质量控制。

与水解度、分子量分布、氨基酸分析等现有技术手段相比，本发明以多肽VV和多肽VN作为质量控制目标建立质控方法，可在分子层面直接、准确地描述低聚肽原料中已知低聚肽的变化情况，且这种基于已知低聚肽的质量控制方法大大提升了低聚肽原料的造假难度和生产稳定性质量控制技术水平。

优选地，所述步骤(1)中，多肽VV和多肽VN标准品溶液的质量浓度为10-100ng/mL。

优选地，所述步骤(2)中，大豆低聚肽样品溶液的质量浓度为10-1500μg/mL；进一步优选地，所述大豆低聚肽样品溶液的配制方法为：将大豆低聚肽样品充分分散于超纯水中，搅拌后离心，经过滤膜后得到大豆低聚肽样品溶液。

优选地，所述步骤(2)中，搅拌的温度为40-55℃，搅拌的时间为30-60min，离心的时间为5-25min，离心的转速为4000-10000r/min，离心的温度为0-25℃，滤膜为水系滤膜、有机滤膜中的至少一种。