[发明专利]lncRNA TAB2-AS调控TAB2在猪卵巢颗粒细胞中的应用

权利要求书

1.一种调控猪卵巢颗粒细胞TAB2表达的方法，其特征在于：体外环境下，lncRNA TAB2-AS正调控猪卵巢颗粒细胞中TAB2的表达；通过调节lncRNA TAB2-AS的表达水平，可实现猪卵巢颗粒细胞中TAB2表达的调控；所述的lncRNA TAB2-AS核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

增加外源性lncRNA TAB2-AS，TAB2 mRNA表达量上升，TAB2蛋白表达量上升；抑制lncRNA TAB2-AS表达，TAB2 mRNA表达量下降，TAB2蛋白表达量下降。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：

所述的增加外源性lncRNA TAB2-AS通过基因过表达技术实现，采用的基因过表达载体通过如下方式制备得到：

（1）提取猪卵巢颗粒细胞的RNA，将其逆转录成cDNA，以cDNA为模板进行PCR扩增，得到目的片段；

（2）将目的片段连接到用限制性内切酶BamH I和Xho I酶切后的pcDNA3.1载体上，得到重组载体。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：

步骤（1）中进行PCR 扩增所用引物如下所示：

lncRNA TAB2-AS Forward：5′-CGCGGATCCACTGCCCCAACAGTAAAGCA-3′；

lncRNA TAB2-AS Reverse：5′-CCGCTCGAGGCCCTCATAAGTGCCGATGT-3′。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：

所述的抑制lncRNA TAB2-AS表达通过反义寡核苷酸实现。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：

所述的反义寡核苷酸序列如下：

ASO-lncRNA TAB2-AS：5′-AAAGGGCTGTAGGTACTGCT-3′。

7.lncRNA TAB2-AS调控TAB2在猪卵巢颗粒细胞中的应用，其特征在于：体外环境下，由增加外源性lncRNA TAB2-AS表达引起的抑制猪卵巢颗粒细胞凋亡的功能表型，能在抑制TAB2表达后恢复；或者，体外环境下，由抑制lncRNA TAB2-AS表达引起的促进猪卵巢颗粒细胞凋亡的功能表型，能在增加外源性TAB2后恢复；所述的lncRNA TAB2-AS核苷酸序列如SEQID NO：1所示。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：

所述的增加外源性TAB2通过基因过表达技术实现，采用的基因过表达载体通过如下方式制备得到：

（1）提取猪卵巢颗粒细胞的RNA，将其逆转录成cDNA，以cDNA为模板进行PCR扩增，得到目的片段；

（2）将目的片段连接到用限制性内切酶BamH I和Xba I酶切后的pcDNA3.1载体上，得到重组载体。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：

步骤（1）中进行PCR 扩增所用引物如下所示：

TAB2 Forward：5′-CGGGATCCGAATGGCCCAAGGAAGCCAC-3′；

TAB2 Reverse：5′-GCTCTAGAAAGCAGTGAAACTCTCCCCC-3′。

10.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：

所述的抑制TAB2表达通过RNA干扰技术实现，采用的小干扰片段序列如下：

si-TAB2：5′-CCCATAGCCAATATAACAT-3′。