[发明专利]高通量实时荧光检测分析系统FLIPR在植物钙信号检测中的应用

权利要求书

1.高通量实时荧光检测分析系统FLIPR在植物钙信号检测中的应用，其特征在于，所述植物包括报春花属植物、缬草属植物、烟草属植物和拟南芥属植物。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述报春花属植物包括报春花，所述缬草属植物包括缬草，所述烟草属植物包括烟草，所述拟南芥属植物包括拟南芥。

3.一种基于FLIPR检测植物钙信号的样本前处理方法，其特征在于，包括如下步骤：

将植物原生质体与钙染料混合，得到第一混合物；

将所述第一混合物与钙信号螯合剂和外源钙信号刺激溶液混合，将得到的第二混合物孵育和第一离心，得到待上机样本。

4.根据权利要求3所述的样本前处理方法，其特征在于，所述植物原生质体与钙染料的体积比为(0.1～10)：(0.5～5)。

5.根据权利要求3所述的样本前处理方法，其特征在于，所述钙信号螯合剂包括EGTA溶液、乙二胺或2，2'-联吡啶；所述外源钙信号刺激溶液包括CaCl₂溶液、CaCO₃溶液或Ca₂NO₃溶液。

6.根据权利要求5所述的样本前处理方法，其特征在于，当所述钙信号螯合剂为EGTA溶液，所述外源钙信号刺激溶液为CaCl₂溶液时，所述EGTA溶液和CaCl₂溶液体积总和与第一混合物的体积比为(0.1～6)：(1～15)。

7.根据权利要求6所述的样本前处理方法，其特征在于，所述EGTA溶液的摩尔浓度为5～200μM；所述CaCl₂溶液的摩尔浓度为220～450mM。

8.根据权利要求3～7任一项所述的样本前处理方法，其特征在于，所述植物原生质体的提取方法包括如下步骤：

将植物组织与裂解液混合，裂解5～7h，过滤和第二离心，得到植物组织裂解物；

将所述植物组织裂解物与质量浓度为5～20％的CPW洗液混合，第三离心，得到原生质体洗液混合物；

将所述原生质体洗液混合物置于质量浓度为0.5～50％的蔗糖溶液表面，第四离心，得到植物原生质体；

所述植物组织的质量与裂解液的体积比为0.1～10g：1.0～30mL。

9.根据权利要求8所述的样本前处理方法，其特征在于，所述裂解液包括如下组分：1wt.％纤维素酶、1wt.％果胶酶、0.7mol/L甘露醇、0.7mmol/L KH₂PO₄和10mmol/L CaCl₂·2H₂O，所述裂解液的pH值为6.8～7.0。

10.一种基于FLIPR检测植物钙信号的检测方法，其特征在于，将权利要求3～9任一项所述的样本前处理方法得到的待上机样本上机，采用高通量实时荧光检测分析系统FLIPR对所述待上机样本进行钙信号检测。