[发明专利]硅胶柱层析同时分离纯化磷脂酰胆碱和鞘磷脂的方法

权利要求书

1.硅胶柱层析同时分离纯化磷脂酰胆碱和鞘磷脂的方法，其特征在于，包括以下步骤：

按硅胶与粗磷脂的重量比为150:1～300:1，以硅胶为柱层析固定相，用第一个洗脱剂溶解粗磷脂，上样，依次利用第一个洗脱剂和第二个洗脱剂进行梯度洗脱，用自动部分收集器收集流出液，期间通过薄层层析色谱实时监测，其中梯度洗脱的具体方法为：先通过第一个洗脱剂洗脱出非鞘磷脂部分，从中合并相同的含单一的磷脂酰胆碱斑点流份，再通过第二个洗脱剂快速洗脱鞘磷脂部分，合并相同的含单一的鞘磷脂斑点流份，第一个洗脱剂为体积比24～28:24～28:24～28:10～12:9～14的二氯甲烷-异丙醇-乙酸甲酯-甲醇-水体系，第二个洗脱剂为体积比5:5:1～1.55的二氯甲烷-甲醇-水体系；最后分别对合并的磷脂酰胆碱斑点流份和鞘磷脂斑点流份浓缩干燥，分别得到高纯磷脂酰胆碱和高纯鞘磷脂。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，粗磷脂的提取来源为磷脂富集物、乳制品、植物油料、蛋黄。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，乳制品为动物乳、酪乳粉、黄油或乳清；植物油料为大豆、菜籽或葵花籽。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，柱层析所用硅胶为200～300目，装填硅胶径高比为1:5～1:8。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，粗磷脂与第一个洗脱剂的质量体积比为1g：25～40mL。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，上样后，使粗磷脂溶液上液面降至硅胶填料上界面，使粗磷脂与硅胶充分吸附30min～60min。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，梯度洗脱具体步骤为：先用第一个洗脱剂洗脱3～3.8倍柱体积，从中合并相同的含单一的磷脂酰胆碱斑点流份，再用第二个洗脱剂洗脱1.2～1.6倍柱体积，合并相同的含单一的鞘磷脂斑点流份。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，TLC实时监测条件为：薄层板固定相为硅胶，展开剂为第一个洗脱剂体系，显色剂为碘蒸汽。