[发明专利]用于相对定量分析猪细胞色素P450酶CYP2E1的肽段组合物及应用

说明书

本申请提供一种用于相对定量分析猪细胞色素P450酶CYP2E1的肽段组合物、方法及试剂盒。用于相对定量分析猪细胞色素P450酶CYP2E1的肽段组合物，包括第一肽段、第二肽段和第三肽段；第一肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；第二肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；第三肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。能够在蛋白水平上，快速高效的定量检测猪源CYP2E1，提高了猪源CYP2E1的检测通量和效率。相较于基于抗体的Western Blot法具有更强的特异性。

技术领域

本申请涉及蛋白相对定量分析领域，尤其涉及一种用于相对定量分析猪细胞色素P450酶CYP2E1的肽段组合物及应用。

背景技术

CYP2E1是正常的猪肝组织中含量最高的一种细胞色素P450酶(Cytochrome P450，CYP)，由493个氨基酸组成，分子量为56.9Kda，主要分布在肝脏，并且富集于肝小叶中心区域。主要作用是参与前致癌物及环境毒物(苯、乙醇、四氯化碳和氯乙烯等)的生物转化。CYP2E1催化多种需要NADPH的氧化生化反应，在催化底物代谢过程中常产生羟乙基、醛类和过氧化物等中间产物，氧化不完全则导致氧化自由基及其活性衍生物(Reactive oxygenspecies，ROS)的生成，尤其在铁催化下，CYP2E1生成ROS(如超氧阴离子自由基和过氧化氢)能力增强，生成强氧化剂(如羟基自由基)，打破体内抗氧化系统平衡，导致脂质过氧化，从而引起细胞膜破坏、DNA损伤等，影响猪的健康水平，使养猪业遭受损失。

因此，亟需深入研究猪的细胞色素P450酶CYP2E1的相对定量分析方法。

发明内容

有鉴于此，本申请的目的在于提出一种用于相对定量分析猪细胞色素P450酶CYP2E1的肽段组合物及应用。

基于上述目的，本申请提供了一种用于相对定量分析猪细胞色素P450酶CYP2E1的肽段组合物，包括第一肽段、第二肽段和第三肽段；

其中，所述第一肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述第二肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；所述第三肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。

在其中一些实施例中，所述第一肽段的母离子为861.96m/z，子离子为1234.65m/z，1121.57m/z和710.36m/z，子离子对应的碰撞能量为27V；所述第二肽段的母离子为599.83m/z，子离子为998.58m/z，861.52m/z和714.45m/z，子离子对应的碰撞能量为27V；所述第三肽段的母离子为578.31m/z，子离子为856.47m/z，658.37m/z和284.17m/z，子离子对应的碰撞能量为27V。

本申请实施例还提供一种相对定量分析猪细胞色素P450酶CYP2E1的方法，应用如前任一项所述的肽段组合物，对猪细胞色素P450酶CYP2E1进行相对定量分析。

在其中一些实施例中，所述对猪细胞色素P450酶CYP2E1进行相对定量分析包括：

提供不同组别的待测猪组织样品，分别进行蛋白提取和蛋白酶解处理，得到不同组别的待测肽段；

通过液相色谱-质谱联用的方法对所述不同组别的肽段组合物，分别进行检测；

比较不同组别的肽段组合物的检测结果，以对不同组别的待测猪组织样品中猪细胞色素P450酶CYP2E1进行相对定量。

在其中一些实施例中，所述待测猪组织样品为待测猪肝脏样品。

在其中一些实施例中，所述液相色谱-质谱联用的方法采用高效液相色谱-串联质谱联用仪。

在其中一些实施例中，所述液相色谱-质谱联用的测定条件如下：