[发明专利]一种生产尿嘧啶核苷的方法

说明书

本发明提供了一种生产尿嘧啶核苷的方法，属于生物工程技术领域，所述方法包括以下步骤：将胞嘧啶核苷经胞嘧啶核苷脱氨酶转化，得到尿嘧啶核苷。采用本发明提供的方法简单，环境友好，得到的尿嘧啶核苷的纯度为99.95％，转化率为99.5％以上。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，尤其涉及一种生产尿嘧啶核苷的方法。

背景技术

尿嘧啶核苷是一种核苷化合物，作为药物可以用于治疗抗巨型红血球贫血，治疗肝、脑血管、心血管等疾病，也是制造氟尿嘧啶(S-FC)、脱氧核苷、碘苷(IDUR)、溴苷(BUDR)、氟苷(FUDR)等药物的主要原料。

目前尿嘧啶核苷的传统生产主要为化学法和生物法。化学法主要为RNA的化学水解，制备两种嘧啶核苷，这不仅需要大量的RNA材料，而且两种嘌呤核苷及两种嘧啶核苷必须产销平衡，成本要求高，产物多，分离过程复杂，收率低。

生物法主要分为发酵法和生物合成法。发酵法主要是通过基因改造或者自然筛选获得产尿嘧啶核苷的菌株，经发酵培养后提取获得尿嘧啶核苷。中国专利CN10848162A《一种尿苷的生产方法》中提出利用分子生物学方法获得工程菌，在发酵罐中对工程菌进行发酵培养获得尿苷发酵液，并从发酵液中分离提取获得尿苷晶体。该法工艺路线复杂，且终产品纯度达不到99％。中国专利CN113755414A《一种生产尿苷的重组微生物及生产尿苷的方法》中提出通过生物发酵法将重组菌株在5升发酵罐中生产尿苷，该法产量较低20g/L，且存在发酵不稳定等影响。

生物合成法主要是以尿嘧啶、嘌呤核苷等为底物，在催化剂的作用下合成尿嘧啶核苷。中国专利CN113969299A《一种生物转化合成尿苷的方法》中提出用密西根克雷伯氏菌为菌种，利用该菌株湿菌体为酶源将肌苷和尿嘧啶一步转化为尿苷。由于转化需要的菌体量很大，达到18g/L，造成实际过程中转化液微滤或离心处理会很慢，不适用于大生产使用。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种生产尿嘧啶核苷的方法，本发明制备尿嘧啶核苷的方法简单，纯度高，对环境友好。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种生产尿嘧啶核苷的方法，包括以下步骤：将胞嘧啶核苷经胞嘧啶核苷脱氨酶转化，得到尿嘧啶核苷。

优选的，所述胞嘧啶核苷与胞嘧啶核苷脱氨酶的质量比为400:1；

优选的，还包括：

将所述胞嘧啶核苷溶于水，得到胞嘧啶核苷溶液；

将所述胞嘧啶核苷溶液与胞嘧啶核苷脱氨酶的酶液混合后进行第一反应，得到尿嘧啶核苷；

所述第一反应的条件包括：反应的温度为37℃，反应的时间为5h。

优选的，所述胞嘧啶核苷与水的质量比为1～3:5；

优选的，所述胞嘧啶核苷溶液与酶液的体积比为1000:1。

优选的，所述胞嘧啶核苷溶液与酶液混合进行第一反应，得到反应物后还包括：将所述反应物与酶液混合后进行第二反应、脱色、浓缩、结晶、打浆和烘干，得到尿嘧啶核苷。

优选的，所述反应物与酶液的体积比为4000:1；

所述第二反应的条件包括：反应的温度为37℃，反应的时间为2h。

优选的，使用活性炭进行脱色，所述活性炭的使用量为5g/L；

所述脱色的条件包括：脱色的温度为70℃，脱色的时间为30min。

优选的，所述浓缩后得到浓缩液，所述浓缩液中尿嘧啶核苷的质量百分含量为60～70％；