[发明专利]一种柯萨奇病毒B组1型毒株及应用

说明书

本发明公开了一种柯萨奇病毒B组1型毒株，毒株命名为KM7‑X29，于2022年3月6日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：V202213，保藏地址为中国.武汉.武汉大学，该毒株利用Vero细胞进行培养，病毒收获后经过灭活、澄清、超滤浓缩、蔗糖密度梯度离心、除菌过滤，得到病毒纯化液，进一步将该纯化液制备成免疫原性良好、遗传稳定性高的柯萨奇病毒B组1型灭活疫苗。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，更具体地说是涉及一种柯萨奇病毒B组1型毒株及应用。

背景技术

柯萨奇病毒B组1型(coxsackievirus B1，CVB1)属于小核糖核酸病毒科的肠道病毒属，是B组柯萨奇病毒(CVB)的一个主要成员。CVB1感染会引起各种不同程度的疾病或症状，如手足口病(Hand foot mouth disease，HFMD)、脑炎、心肌炎、无菌性脑膜炎甚至死亡。此外，CVB1引起了显著的发病率，在美国疾病控制和预防中心(CDC)报告的前15种肠道病毒血清型中一直排名靠前(CDC2010)。此外，CVB1还与1型糖尿病(T1DM)的发展有关。虽然CVB1已经构成了相当大的公共卫生威胁，但目前还没有批准的疫苗或抗病毒疗法，因此有必要采取不同的策略加快研发预防性疫苗。

目前肠道病毒疫苗仅有针对脊髓灰质炎病毒和手足口病中肠道病毒71型的灭活疫苗，尚无针对CVB的上市疫苗。国外的研究人员报道了几项CVB疫苗的生产和临床前试验：小鼠接种灭活的CVB1疫苗2～3周即产生了强烈的抗CVB1中和抗体反应；CVB1感染可以加速NOD和SOCS-1-Tg小鼠的糖尿病发病，并且CVB1疫苗不仅可以防止CVB感染，而且可以防止CVB1诱导的SOCS-1-Tg小鼠糖尿病的发展。此外，其他形式的CVB1疫苗，如重组亚单位疫苗、DNA疫苗和减毒活疫苗，在小鼠模型中也有不同程度的保护效果。

灭活疫苗没有减毒活疫苗毒力返祖及可引发疫苗相关疾病的缺点，具有较好免疫原性和安全性。尽管国外已经开发CVB1灭活疫苗，但是其流行株与国内流行株的基因型不一致，其对中国流行株保护效率低，故仍有必要继续开发安全有效的适合中国的CVB1灭活疫苗。

因此，如何提供一种新的CVB1毒株，并将其应用于制备灭活疫苗中是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种柯萨奇病毒B组1型毒株，可应用于制备柯萨奇病毒B组1型灭活疫苗。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种柯萨奇病毒B组1型毒株，所述毒株命名为KM7-X29，于2022年3月6日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：V202213，保藏地址为中国.武汉.武汉大学。

作为与上述技术方案相同的发明构思，本发明还请求保护权所述的柯萨奇病毒B组1型毒株在制备柯萨奇病毒B组1型灭活疫苗中的应用。

作为与上述技术方案相同的发明构思，本发明还请求保护一种柯萨奇病毒B组1型灭活疫苗，包括KM7-X29毒株的抗原和铝佐剂。

优选的，铝含量浓度为0.35mg/ml。

作为与上述技术方案相同的发明构思，本发明还请求保护一种柯萨奇病毒B组1型灭活疫苗的制备方法，其特征在于，以毒株KM7-X29制备灭活疫苗。

作为上述技术方案优选的技术方案，制备疫苗具体过程包括下述步骤：

(1)37℃、5％CO₂静止培养Vero细胞，直至细胞长成单层，将柯萨奇病毒B组1型毒株KM7-X29以感染复数为0.001～0.1接种到所述细胞培养液中，35℃、5％CO₂下培养3-4天直至细胞病变达到90％以上；

(2)收获病变细胞的培养液，获得病毒收获液澄清过滤后，灭活，超滤浓缩获得病毒浓缩液；