[发明专利]一种壳多糖酶3样蛋白1试剂盒

说明书

本发明提供一种壳多糖酶3样蛋白1试剂盒，包括：第一试剂，包括：缓冲液、表面活性剂、盐、防腐剂、抗干扰物质；第二试剂，包括：纳米微球标记的CHI3L1多克隆抗体或纳米微球标记的两株具有CHI3L1不同结合位点的单克隆抗体混合物。本发明解决了现有CHI3L1检测方法操作复杂的技术问题，实现了操作简便的技术效果。

技术领域

本发明涉及体外诊断技术领域，具体而言，涉及一种壳多糖酶3样蛋白1试剂盒。

背景技术

壳多糖酶3样蛋白1(Chitinase-3-like protein 1)(CHI3L1)是糖基水解酶家族18中的一员，糖基水解酶家族18包括几丁质酶和几丁质酶相关蛋白(CLPs)。CHI3L1是一种凝集素，结合几丁质和肝素，但它没有几丁质酶活性。因为其分子量(40kDa)和其三个n端氨基酸的一个字母编码而被命名为YKL-40，也被称为人软骨糖蛋白-39。

CHI3L1功能性研究表明其可参与炎症紊乱、细胞迁移、组织重塑、肿瘤发生和纤维化过程。研究发现，高水平的CHI3L1可增加患者发生肝纤维化的风险，可能与CHI3L1引起细胞因子改变、导致炎症紊乱及激活固有免疫应答，进而促进纤维化发展。另外，CHI3L1可由HSC分泌，其血清浓度与由HSC和成纤维细胞所分泌的细胞外基质相关，因此，CHI3L1血清浓度在一定程度上可以反映肝纤维化的程度。国内外多项研究发现在酒精性肝病及非酒精性脂肪肝患者中血清CHI3L1水平较正常对照组升高，并与肝纤维化程度呈正相关，肝硬化患者中水平最高。Saitou等发现CHI3L1诊断明显肝纤维化、严重肝纤维化及早期肝硬化的受试者工作特征曲线下面积可分别达0.792、0.914、0.936，提示CHI3L1是一个潜在的诊断性能较好的血清学标记物。

目前CHI3L1检测方法有ELISA法、化学发光免疫分析法等，以上检测方法均采用双抗体夹心法原理，其中第一抗体(固定抗体、包被抗体)固定在酶标板、磁微粒等固相载体上，第二抗体(检测抗体、标记抗体)用于标记酶、发光物质等，其操作方法是样本先行与第一抗体结合，然后清洗去除多余的样本，再加入第二抗体形成三明治复合物，然后进行酶催化或发光反应。

存在的问题是：上述CHI3L1检测方法试剂成分多(3种或以上)，操作复杂。

发明内容

本发明解决了现有CHI3L1检测方法操作复杂的技术问题，实现了检测过程操作简便的技术效果。

为解决上述问题，本发明提供一种壳多糖酶3样蛋白1试剂盒，包括：第一试剂，包括：缓冲液、表面活性剂、盐、防腐剂、抗干扰物质；第二试剂，包括：纳米微球标记的CHI3L1多克隆抗体或纳米微球标记的两株具有CHI3L1不同结合位点的单克隆抗体混合物。

与现有技术相比，采用该技术方案所达到的技术效果：本发明提供的CHI3L1试剂盒，将两株具有CHI3L1不同结合位点的单克隆抗体混合成混合抗体，或采用多克隆抗体作为一种试剂，解决了两种抗体分别单独作为一种试剂组分的问题，减少了试剂成分，进而配置更加简单，操作更简便。并且，采用均相分析法，节省了清洗步骤，不需要中间清洗步骤，操作人员在操作时只需将待检测品与第一试剂和第二试剂进行混合后检测即可，操作更加简便快捷。

分析方法如下：将待检测品加入第一试剂中，待检测品被第一试剂稀释，然后加入第二试剂，第二试剂中纳米微球标记的CHI3L1抗体与待检测品中的CHI3L1特异性结合形成抗原抗体复合物，进一步地，纳米微球聚合成复合物。复合物的大小及数量影响光的散射，复合物的量与待检测品中的CHI3L1浓度水平呈正相关关系，通过检测复合物对光的散射或透光率可对待检测品中的CHI3L1进行定量分析，操作简单快捷。

在本发明的一个实例中，试剂盒还包括校准物质，校准物质包括浓度范围在0-1000ng/mL的重组人CHI3L1蛋白溶液或干粉。