[发明专利]一种蜱传脑炎病毒病毒样颗粒疫苗及其制备方法

说明书

本发明涉及生物制品技术领域，尤其涉及一种蜱传脑炎病毒病毒样颗粒疫苗及其制备方法。所述蜱传脑炎病毒病毒样颗粒疫苗的免疫原性成分为蜱传脑炎病毒prM‑E蛋白；所述蜱传脑炎病毒prM‑E蛋白包括如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。本发明采用昆虫细胞‑杆状病毒表达系统对蜱传脑炎病毒特定的结构蛋白prM‑E蛋白进行表达和纯化得到一种蜱传脑炎病毒样颗粒。本发明提供的蜱传脑炎病毒样颗粒具有良好的免疫原性，可以诱导小鼠产生特异性免疫应答，对于蜱传脑炎有着较好的预防效果。

技术领域

本发明涉及生物制品技术领域，尤其涉及一种蜱传脑炎病毒病毒样颗粒疫苗及其制备方法。

背景技术

蜱传脑炎(Tick-borne encephalitis，TBE)又称森林脑炎，是由蜱传脑炎病毒(Tick-borne encephalitis virus，TBEV)引起的以神经系统病变为主的自然疫源性疾病，可在人与动物中引起致死性脑炎并伴有长期的后遗症，严重威胁人类健康。随着全球气候变化，蜱的数量和活动范围不断扩大，蜱传疾病流行和传播成为重要的公共卫生问题。作为重要的蜱传病原体之一，针对蜱传脑炎病毒的疫苗研究从未停止，研制安全性更高、免疫效果更好的新型基因工程疫苗是本领域研究的热点和主要方向。

蜱传脑炎病毒为黄病毒科黄病毒属的单股正链RNA病毒，长约11kb，包含一个开放阅读框。单个开放阅读框编码三个结构蛋白(C、prM和E)和七个非结构蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5)。黄病毒是平均直径为40-60nm的包膜病毒，成熟病毒粒子表面由90个E和M蛋白的二聚体组成。双层脂质包膜包裹着核衣壳(由C蛋白构成)，衣壳内包裹着单股正链RNA基因组。黄病毒C蛋白既可与病毒基因组一起形成核衣壳，还可与脂质体相互作用，参与胞膜重塑，但不诱导机体产生中和抗体；C蛋白的跨膜结构域可作为prM蛋白的附加锚点和信号序列。prM蛋白被宿主弗林蛋白酶切割，产生pr片段和M蛋白。M蛋白通过两个跨膜结构域固定在脂质包膜上，在成熟颗粒中与E蛋白的跨膜结构域相互作用。E蛋白为包膜蛋白，包含中和抗体表位，在免疫预防中发挥重要作用。

发明内容

为了解决现有技术存在的问题，本发明提供一种蜱传脑炎病毒病毒样颗粒疫苗及其制备方法。

第一方面，本发明提供一种蜱传脑炎病毒病毒样颗粒疫苗，所述蜱传脑炎病毒病毒样颗粒疫苗的免疫原性成分为蜱传脑炎病毒prM蛋白；所述蜱传脑炎病毒prM-E蛋白包括如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。

进一步地，所述蜱传脑炎病毒prM-E蛋白由SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列编码得到。

本发明采用蜱传脑炎病毒prM-E蛋白作为病毒样颗粒疫苗的免疫原性成分，在不含病毒遗传物质的情况下，具有较高的安全性，同时还能够具备较高的免疫原性，可以引起机体内有效的免疫应答。

昆虫细胞-杆状病毒表达系统表达外源蛋白时，需要信号肽的辅助。本发明在研究过程中发现，使用杆状病毒信号肽时，无法成功构建重组质粒，因此只能选择黄病毒本身的信号肽，即黄病毒C蛋白的跨膜结构域。有研究表明TBEV同属的JEV信号肽更有利于黄病毒蛋白的表达与分泌，本研究分别使用JEV和TBEV信号肽构建重组蛋白，发现使用TBEV信号肽时，重组杆状病毒感染悬浮细胞后得到的M-E蛋白量更多。因此使用TBEV C蛋白的跨膜结构域作为信号肽，也就本发明提供的SEQ ID NO.1前16位氨基酸序列。

进一步地，还包括佐剂；所述佐剂包括Montanide ISA 201VG佐剂、Poly(I:C)、Montanide Gel 02PR、Montanide IMS 1313VG NST、polysaccharide、Alum、Freund或Prodavx中的一种或多种。

进一步地，所述佐剂为Poly(I:C)和Montanide ISA201VG复合佐剂，所述免疫原性成分和所述佐剂的体积比为(5～9)：(11～15)。