[发明专利]一种香蕉枯萎病菌内源报告基因carS及其应用在审
| 申请号： | 202210606644.X | 申请日： | 2022-05-31 |
| 公开（公告）号： | CN115011615A | 公开（公告）日： | 2022-09-06 |
| 发明（设计）人： | 张欣;彭军;曾凡云;王艳玮;漆艳香;丁兆建;谢艺贤 | 申请（专利权）人： | 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所 |
| 主分类号： | C12N15/52 | 分类号： | C12N15/52;C12N15/90;C12N15/80;C12N9/00;C12R1/77 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 陈欢 |
| 地址： | 570100 *** | 国省代码： | 海南;46 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 香蕉 枯萎 病菌 内源 报告 基因 cars 及其 应用 | ||
1.一种香蕉枯萎病菌内源报告基因carS，其特征在于：所述内源报告基因carS为香蕉枯萎病菌4号生理小种Foc4的Foc4carS基因FOIG_05085。
2.如权利要求1所述的一种香蕉枯萎病菌内源报告基因carS，其特征在于：所述Foc4carS基因FOIG_05085的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
3.如权利要求2所述的一种香蕉枯萎病菌内源报告基因carS，其特征在于：所述Foc4carS基因FOIG_05085具有RING-finger蛋白结构域。
4.如权利要求3所述的一种香蕉枯萎病菌内源报告基因carS，其特征在于：所述Foc4的Foc4carS基因FOIG_05085中含有内含子，内含子的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
5.一种香蕉枯萎病菌carS基因敲除突变体的构建方法，其特征在于：采用Split-marker同源重组技术获得基因敲除突变体Foc4ΔcarS。
6.如权利要求5所述的一种香蕉枯萎病菌carS基因敲除突变体的构建方法，其特征在于：构建Split-marker基因敲除重组DNA片段，包含靶标基因5’上游1kb左右的同源臂序列、抗性基因序列、3’下游1kb左右的同源臂序列，具体操作分为两步PCR进行：
(1)第一轮PCR扩增三个片段：NEO-F/NEO-R扩增NEO抗性基因1.4kb；carS-U-F/carS-NEO-U-R扩增左端carS-LB1 1595bp；引物carS-NEO-D-F/carS-D-R扩增右端carS-RB11582bp；
(2)第二轮PCR扩增2个重组DNA片段：左端(5’上游)重组DNA片段扩增(LB2+NE)：carS-N-F/NEO-R1为引物，carS-LB1+NEO-1.4kb为模板，扩增产物大小2010bp；右端(3’下游)重组DNA片段扩增(EO+RB2)：NEO-F1/carS-N-R为引物，NEO-1.4kb+carS-RB1为模板，扩增产物2196bp；
(3)将5’上游重组DNA和3’下游重组DNA等体积混合后，进行原生质体转化。
7.一种香蕉枯萎病菌内源报告基因carS的应用，其特征在于：香蕉枯萎病菌4号生理小种Foc4的Foc4carS基因FOIG_05085用于作为香蕉枯萎病菌内源报告基因。
8.如权利要求1所述的一种香蕉枯萎病菌内源报告基因carS的应用，其特征在于：所述Foc4carS基因FOIG_05085用于调控次生代谢产物类胡萝卜素的生物形成，不参与生理和致病力调控。
9.如权利要求1所述的一种香蕉枯萎病菌内源报告基因carS的应用，其特征在于：以香蕉枯萎病菌4号生理小种Foc4的Foc4carS基因FOIG_05085为靶标基因，用于构建分子生物学技术体系。
10.如权利要求1所述的一种香蕉枯萎病菌内源报告基因carS的应用，其特征在于：以香蕉枯萎病菌4号生理小种Foc4的Foc4carS基因FOIG_05085为靶标基因，用于构建基因编辑体技术体系。
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