[发明专利]一种杀鲑气单胞菌杀鲑亚种PCR检测试剂盒及其使用方法在审
| 申请号： | 202210609383.7 | 申请日： | 2022-05-31 |
| 公开（公告）号： | CN115651989A | 公开（公告）日： | 2023-01-31 |
| 发明（设计）人： | 李杰;刘静静;李贵阳;阎永伟;莫照兰 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院黄海水产研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/01 |
| 代理公司： | 山东易佰捷知识产权代理事务所(普通合伙) 37326 | 代理人： | 张晓 |
| 地址： | 266000 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 杀鲑气单胞菌杀鲑亚种 pcr 检测 试剂盒 及其 使用方法 | ||
1.一种杀鲑气单胞菌杀鲑亚种PCR检测试剂盒，其特征在于：包括缓冲液、Taq DNA聚合酶、dNTPs、杀鲑气单胞菌杀鲑亚种特异性PCR检测引物、阳性对照和阴性对照，所述阳性对照为杀鲑气单胞菌杀鲑亚种ATCC33658基因组DNA，所述阴性对照为灭菌双蒸水；所述杀鲑气单胞菌杀鲑亚种PCR检测引物如A.salmonicida F1/R1所示。
2.根据权利要求1所述的杀鲑气单胞菌杀鲑亚种PCR检测试剂盒，其特征在于，PCR检测体系的组分为：10×PCR buffer：2.5uL，2mmdNTPs：2uL，25mM MgSO4：1.5uL，1u/μL酶：0.5μL，10μmol/L引物各1.5uL，ddH2O：15.5μL，模板：1μL。
3.根据权利要求1所述的杀鲑气单胞菌杀鲑亚种PCR检测试剂盒，其特征在于，反应程序为：94℃预变性5min，98℃变性10s，55℃退火30s、68℃延伸10s，35个循环，68℃充分延伸10min。
4.根据权利要求2所述的杀鲑气单胞菌杀鲑亚种PCR检测试剂盒，其特征在于：所述10×PCR缓冲液含有100mM KCl、80mM(NH4)SO4、pH为9.0的100mM Tris-HCl、15mM MgCl2和0.5％Tergitol-type NP-40。
5.根据权利要求2所述的杀鲑气单胞菌杀鲑亚种PCR检测试剂盒，其特征在于：所述dNTPs包括dGTP、dCTP、dATP、dTTP，各组分浓度均为2.5mM。
6.一种使用权利要求1-5任意一项所述的杀鲑气单胞菌杀鲑亚种PCR检测试剂盒进行非诊断性检测的方法，包括以下步骤：
S1：使用煮沸法或商品化试剂盒提取细菌基因组DNA，得到检测模板；
S2：PCR扩增，将10×PCR缓冲液、dNTPs、Taq DNA聚合酶、检测引物以及DNA模板加入灭菌PCR反应管中，添加灭菌双蒸水至总体积25μl，同时设置阳性、阴性对照，使用PCR仪进行扩增反应；采用2％琼脂糖凝胶电泳对扩增产物进行电泳检测并分析结果；
S3：如果电泳结果中出现明显亮带，则表示此样本为阳性，反之为阴性。
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