[发明专利]PAT/pat单抗杂交瘤细胞株及其产生的抗体和应用

说明书

一种PAT/pat单抗杂交瘤细胞株及其产生的抗体和应用，本发明利用工程菌株表达、纯化得到的高纯度抗除草剂蛋白PAT/pat作为抗原，通过杂交瘤技术制备了PAT/pat单抗杂交瘤细胞株PA1‑18030031/1B6 2D3和PAT/pat单抗杂交瘤细胞株PA1‑18030031/1F5 2F2，细胞株分泌单抗腹水纯化后得到的抗体间接ELISA效价分别为1:1792000和1:1024000，该单抗可以特异性识别原核表达的重组PAT/pat蛋白及转基因玉米中的内源PAT/pat蛋白，分泌抗PAT/pat抗除草剂蛋白的鼠单抗杂交瘤细胞株的构建为转基因玉米中该蛋白的检测提供了物质和技术支撑。

技术领域

本发明涉及生物工程领域，具体涉及PAT/pat单抗杂交瘤细胞株及其产生的抗体和应用。

背景技术

转有抗除草剂基因作物的种植，使在田间喷洒除草剂成为有效防除杂草方式，也因而使抗除草剂性状成为农业生产中最具优势的性状之一。目前，抗除草剂作物占全球转基因作物的80％以上。从发展趋势上看，转基因的作物比例仍在不断增加。

链霉菌(streptomyces)中PAT/pat基因表达的蛋白在乙酰辅酶A存在的情况下能催化乙酰辅酶A与除草剂草铵膦的游离氨基结合，使L-草铵膦变为乙酰-L-草铵膦，从而使除草剂失活，赋予转基因作物抗除草剂特性。PAT/pat基因作为遗传转化中的标记基因广泛应用于基因工程育种中。

随着转基因作物的飞速发展带来巨大经济利益的同时，人们也越来越关注转基因作物可能带来的不可预期的食用安全及环境安全性问题。因此建立合适的方法对转基因食品中转基因成分进行鉴定与检测，能够促进农业转基因生物的安全管理，保障人、动物以及微生物的安全，能够保护生态环境。为了对转基因玉米或者其衍生物中PAT/pat蛋白进行快速的定量或定性分析，研究并得到抗除草剂PAT/pat蛋白的单克隆抗体具有非常大的意义。

发明内容

本发明的目的在于提供PAT/pat单抗杂交瘤细胞株(PA1-18030031/1B6 2D3)和PAT/pat单抗杂交瘤细胞株(PA1-18030031/1F5 2F2)及其产生的抗体及其应用。

为实现上述目的，本发明提供了PAT/pat单抗杂交瘤细胞株，包括生物保藏编号为CGMCC No.19949的PAT/pat单抗杂交瘤细胞株(PA1-18030031/1B6 2D3)以及生物保藏编号为CGMCC No.19948的PAT/pat单抗杂交瘤细胞株(PA1-18030031/1F5 2F2)。

本发明提供的PAT/pat单抗杂交瘤细胞株(PA1-18030031/1B6 2D3)和PAT/pat单抗杂交瘤细胞株(PA1-18030031/1F5 2F2)，已依次于2020年6月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。邮编：100101，保藏编号依次为CGMCC No.19949和CGMCC No.19948。

PAT/pat单抗杂交瘤细胞株的制备方法，包括以下步骤：

a)通过原核表达得到PAT/pat重组蛋白；

b)免疫动物：将PAT/pat重组蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠；

c)细胞融合：收集免疫BALB/c小鼠的脾细胞并与SP2/0细胞进行融合；

d)细胞建株：通过有限稀释法进行亚克隆，亚克隆5-7天进行ELISA检测，直至筛选出稳定分泌阳性抗体的杂交瘤细胞株进行扩大再培养和保存。

上述制备方法在另一种实施方式中，小鼠的脾细胞与SP2/0细胞的融合比例为1:(5-10)。