[发明专利]一种调控CovR提高猪链球菌2型荚膜多糖产量的培养方法

说明书

本发明公开了一种调控CovR提高猪链球菌2型荚膜多糖产量的培养方法，属于猪链球菌的培养领域。本发明的培养方法包括以下步骤：将猪链球菌2型接种到液体培养基中培养至对数期，加入氯化钾继续培养2‑6h，培养得到的猪链球菌2型的荚膜多糖产量得到提高。本发明在现有培养猪链球菌2型的过程中加入一定量的氯化钾即可显著提升荚膜多糖的产量，方法简单，适用性广。本发明发现了CovR在猪链球菌2型合成荚膜多糖中的作用，为猪链球菌2型荚膜多糖的大规模生产提供理论基础和技术支撑。

技术领域

本发明属于猪链球菌的培养领域，具体涉及一种提高猪链球菌2型荚膜多糖产量的培养方法。

背景技术

猪链球菌是一种革兰氏阳性球菌，可导致猪和其他家畜甚至人类出现临床疾病综合征。根据荚膜多糖抗原不同，猪链球菌被分为35个血清型(1–34和1/2血清型)，其中猪链球菌血清2型是最重要的病原菌，也是被广泛研究的病原菌。猪链球菌2型引起的疾病综合征包括中毒性休克、永久性听力损失和结肠癌，也可导致猪脑膜炎，并且给从事猪产业相关人员健康造成极大威胁。目前，接种疫苗是预防猪链球菌2型感染的有效方法。

荚膜是包裹在猪链球菌2型表面一层厚厚的多糖成分，其在病原菌逃逸宿主天然免疫杀伤中扮演重要角色，是猪链球菌2型的重要致病因子。目前，对猪链球菌2型表面荚膜多糖的结构和功能研究比较透彻，其结构组成和功能如下：(1)组成荚膜多糖的成分包括葡萄糖、半乳糖、N-乙酰氨基葡萄糖、鼠李糖和唾液酸，负责荚膜多糖合成的基因位于荚膜多糖基因簇，该基因簇中包含23个开放性阅读框(ORFs)。组成荚膜多糖的5个单糖首先在不同糖基转移酶催化作用下聚合成糖单元，随后糖单元在聚合酶、链长调节酶和输出酶的共同作用下合成包裹在菌体表面的荚膜多糖；(2)包裹在菌体表面的荚膜多糖能抑制补体系统激活和抗吞噬细胞吞噬杀伤，也可通过干扰猪2型链球菌与巨噬细胞Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)的相互作用抑制细胞因子和趋化因子释放，这些皆表明荚膜多糖在猪2型链球菌逃逸宿主天然免疫杀伤中扮演重要角色。鉴于荚膜多糖在猪链球菌2型致病过程中扮演的重要角色，荚膜多糖已经被作为一种可高效刺激机体产生免疫应答的抗原，在临床中广泛使用。然而，由于猪链球菌2型荚膜多糖抗原的产量低，严重制约了荚膜多糖的规模化生产。因此研究可提高猪链球菌2型高表达荚膜多糖的培养基和培养方法将为临床大量生产荚膜多糖抗原提供技术支撑。

猪链球菌2型在生存或致病过程中，通常会通过双组份信号转导系统(TCS)感知和响应环境刺激信号，并通过调节特定基因表达来提高其环境适应能力。目前在猪链球菌2型中，至少有15组TCSs被预测，其中CovR、CiaRH、SalK/SalR、Ihk/Irr和VirR/VirS等TCSs被报道参与猪链球菌2型致病过程。其中孤儿反应调节因子CovR作为双组份信号转导系统成员在猪链球菌2型中被鉴定。已有研究发现，孤儿反应调节因子CovR的缺失导致猪链球菌2型表面荚膜多糖合成增加。但调控孤儿反应调节因子CovR增加猪链球菌2型荚膜多糖合成的因素并不清楚。因此，研究可以调高猪链球菌2型荚膜多糖产量的培养基并揭示该培养基是否通过调控CovR影响猪链球菌2型荚膜多糖合成，将为猪链球菌2型荚膜多糖抗原的大规模生产提供理论基础和技术支撑。

发明内容

本发明的目的在于提供一种提高猪链球菌2型荚膜多糖产量的培养方法，且该培养方法是通过调控CovR提高猪链球菌2型荚膜多糖合成。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种提高猪链球菌2型荚膜多糖产量的培养方法，包括以下步骤：将猪链球菌2型接种到液体培养基中培养至对数期，加入氯化钾继续培养2-6h，培养得到的猪链球菌2型的荚膜多糖产量得到提高。

所述的氯化钾的加入量优选为0.2-0.5g/L；更为优选的，所述的氯化钾的加入量为0.5g/L。