[发明专利]一种气相色谱法测定安立生坦中甲磺酸烷基酯的方法

说明书

本发明提出的是一种气相色谱法测定安立生坦中甲磺酸烷基酯的方法，首先配制待测安立生坦供试品溶液，再配制取甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯和甲磺酸异丙酯对照品溶液，分别注入气质色谱仪，记录色谱图，供试品溶液色谱图中若有甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯被检出，按外标法以峰面积计算含量。本发明可有效分离并准确检测产品中的甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯等杂质，从而有效控制安立生坦的基因毒性杂质限度，对于安立生坦的质量控制有着不可或缺的意义。

技术领域

本发明涉及的是一种气相色谱法测定安立生坦中甲磺酸烷基酯的方法，属于化学检测分析技术领域。

背景技术

内皮素-1（ET-1）是一种有效的自分泌和旁分泌肽，两种受体亚型（ETA和ETB）共同调节ET-1在血管平滑肌和内皮细胞中的作用。ETA的主要作用是血管收缩和细胞增殖，而ETB的主要作用是血管舒张、抑制增殖、以及清除ET-1。在患有肺动脉高压的患者中，血浆ET-1的浓度增高了10倍，并且与右心房平均压力的增加和疾病的严重程度相关。肺动脉高压患者肺组织中ET-1和ET-1mRNA浓度增加9倍，主要集中在肺动脉内皮细胞。这些发现提示了ET-1可能在肺动脉高压的发病和进展中起了重要的作用。

安立生坦（Ambrisentan）是一种与ETA高度结合（Ki=0.011 nM）的受体拮抗剂，与ETB相比对ETA有高选择性（4000-倍），有关对ETA高选择性的临床影响还是未知。安立生坦由Myogen公司研制，后期由吉利德（Gilead）公司开发，葛兰素史克公司（GtaxoSmithKline）获得本品在美国以外的市场许可权，商品名“LETAIRIS®”，于2007年6月15日获FDA批准，获批剂型为口服片剂，制剂规格有5mg和10mg片剂。临床上用于治疗WHO心功能I-III级PAH，以提高活动能力和延缓临床恶化。

该原料药的合成过程中用到甲醇等，可能与甲基嘧啶中产生的甲磺酸反应生产基因毒性杂质甲磺酸甲酯、乙酯和异丙酯。根据ICH-M7原则应将甲磺酸酯类列入基因毒性杂质范畴加以控制，其限度值为150ppm。目前国内暂无相关方法对安立生坦中的甲磺酸烷基酯进行检测或控制。

发明内容

本发明的目的在于解决现有安立生坦药品制备和质量检测过程中存在的上述问题，提出一种气相色谱法测定安立生坦中甲磺酸烷基酯的方法，保证安立生坦制剂研发和生产的质量，对原料药的基因毒性杂质进行控制，满足研发和生产的需求。

本发明的技术解决方案：一种气相色谱法测定安立生坦中甲磺酸烷基酯的方法，具体包括如下步骤：

1）供试品溶液配制：取本品约0.2g，精密称定，置10ml量瓶中，用溶剂Ⅲ（甲醇-N,N-二甲基甲酰胺=1：1）溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中约含0.02g的溶液，作为供试品溶液；

2）对照品溶液配制：取甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯对照品适量，精密称定，置同一量瓶，加溶剂Ⅲ溶解并稀释制成每1ml中含甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯各约1.0μg的溶液，作为对照品溶液；

3）甲磺酸烷基酯测定：精密量取溶剂Ⅲ、对照品溶液各4μl注入气质色谱仪，记录色谱图。空白溶剂应不干扰测定。精密量取对照品溶液、供试品溶液各4μl注入气质色谱仪，记录色谱图。供试品溶液色谱图中若有甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯被检出，按外标法以峰面积计算含量。

进一步的，步骤3）中气质色谱仪的工作条件具体如下：以5%的二苯基-95%二甲基聚硅氧烷为固定液的毛细管柱（30m*0.25mm*0.25μm），程序升温；采用检测器为质谱检测器；载气为氦气。进样口温度为230℃。GC-MS离子源温度200℃，接口温度250℃，溶剂延迟时间3min；SIM采集模式，采集通道m/z分别为110、124、138，采集时间为5min至15min。

进一步的，步骤3）中按外标法以峰面积计算含量的计算公式具体如下：