[发明专利]一种双启动子质粒及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种质粒，其中，所述质粒包括如下以特定顺序连接的元件：

CMV启动子；所述的CMV启动子序列如SEQ ID NO：1所示；

T7 RNA聚合酶基因，其位于真核CMV启动子下游；所述T7RNA聚合酶基因的序列如SEQID NO：3所示；

牛生长激素多腺苷酸化信号序列，其位于所述T7 RNA聚合酶基因下游；所述牛生长激素多腺苷酸化信号序列如SEQ ID NO：5所示；

T7启动子，其位于所述牛生长激素多腺苷酸化信号序列下游；所述T7启动子的序列如SEQ ID NO：4所示；

核糖体结合位点，其位于所述T7启动子下游；所述核糖体结合位点的序列如SEQ IDNO：2所示；

目的基因mGM-CSF，其位于所述核糖体结合位点下游；所述目的基因mGM-CSF的核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示；以及

多聚腺嘌呤核苷酸序列；所述多聚腺嘌呤核苷酸序列为多个腺嘌呤A连在一起组成的RNA序列。

2.权利要求1所述质粒的构建方法，其包括以下步骤：

合成目的基因mGM-CSF；

构建含有目的基因mGM-CSF的第一重组真核表达质粒；

将CMV启动子、核糖体结合位点、T7 RNA聚合酶基因、多聚腺嘌呤核苷酸序列及牛生长激素多腺苷酸化信号序列按照权利要求1中所述质粒的各元件连接顺序重组至第一重组真核表达质粒，获得第二重组真核表达质粒；

对所述第二重组真核表达质粒进行筛选，验证，即获得所述质粒。

3.权利要求1所述质粒在制备抗肿瘤药物中的应用。

4.权利要求1所述质粒在制备mRNA药物的应用。

5.一种药物，其药物的有效成份包含权利要求1所述质粒及用于药物组合的辅料。

6.一种重组细胞，其包含权利要求1所述质粒。