[发明专利]由miRNA-211和H2 在审
| 申请号： | 202210620605.5 | 申请日： | 2022-06-01 |
| 公开（公告）号： | CN114958968A | 公开（公告）日： | 2022-08-30 |
| 发明（设计）人： | 陈文慧;邝敬宇;沈薇;张景慧;唐盛;李婷婷;姚瑶 | 申请（专利权）人： | 江苏科技大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12Q1/6886;C12N15/113;C12N15/11;G01N21/64 |
| 代理公司： | 南京经纬专利商标代理有限公司 32200 | 代理人： | 余俊杰 |
| 地址： | 212100 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | mirna 211 base sub | ||
1.由miRNA-211和H2S协同触发的3D DNA network结构，其特征在于，所述3D DNAnetwork结构包括DNA-立方体框架、Ag NPs和由miRNA-211作为引发链形成的长双链DNA轨道，其中，10nM DNA-立方体框架、7.8ppm Ag NPs和300nM长双链DNA轨道的混合体积比为1:1:40；其中，Ag NPs嵌入DNA-立方体框架内，并与长双链DNA轨道自组装形成网络结构。
2.权利要求1所述由miRNA-211和H2S协同触发的3D DNA network结构的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、制备Ag NP/ssDNA复合物
将NaBH4溶于冰的超纯水中，磁力搅拌下向其中缓慢滴加AgNO3溶液，反应停止后离心、水洗，制得Ag NPs；取ssDNA与Ag NPs混合，振荡、静置交替进行，然后静置时间持续4h孵育，孵育结束后逐次加入NaCl，使体系中NaCl最终浓度达到0.3M，室温下老化12h。离心后使用0.1M PBS洗涤，形成Ag NP/ssDNA复合物；
S2、制备DNA-立方体框架
M13 mp18 DNA与订书钉链混合，遵循一定的退火过程：95℃-70℃，每5℃为一个梯度，每梯度保持5min；70℃-50℃，每2℃为一个梯度，每梯度保持10min；50℃-20℃，每1℃为一个梯度，每梯度保持15min，形成DNA-立方体框架；
S3、制备长双链DNA轨道
将两种发夹DNA，分别为HP1、SEQ ID NO.1，HP2、SEQ ID NO.2，在95℃加热5min，缓慢冷却至室温，取miRNA-211加入等量的HP1、HP2混合溶液中，37℃水浴下反应2h，触发HCR反应形成长双链DNA轨道；
S4、制备3D DNA network结构
将Ag NP/ssDNA复合物溶解于DNA-立方体框架中，再与S3中的HCR反应液等体积混合，在PCR仪中构筑3D DNA network结构；退火程序如下：25℃，10s；35℃，10s；40℃，1min；45℃，10min；40℃，1h；35℃，1h；30℃，1h；25℃，1h；20℃，1h；15℃，1h；10℃，1h；4℃，1h；
S5、分离3D DNA network结构
采用由DNA 1修饰的石英棒从反应体系中提取3D DNA network结构，将石英棒切割并浸没于DNA 1溶液中，涡旋震荡至少2h；然后转移至DNA 2溶液中，37℃水浴条件下孵育1h，所得溶液在4℃保存。
3.根据权利要求2所述的由miRNA-211和H2S协同触发的3D DNA network结构的制备方法，其特征在于，S1中NaBH4水溶液的浓度为4mM，NaBH4和AgNO3的摩尔比为1:1，500nM ssDNA与7.8ppm Ag NPs混合的体积比为2:1。
4.根据权利要求2所述的由miRNA-211和H2S协同触发的3D DNA network结构的制备方法，其特征在于，S1中ssDNA浓度为500nM；PBS为0.1M，包括0.1M NaCl,10mM磷酸盐。
5.根据权利要求2所述的由miRNA-211和H2S协同触发的3D DNA network结构的制备方法，其特征在于，S1中滴加AgNO3溶液的反应时间为10min，离心条件为8000rpm离心5min；ssDNA与Ag NPs混合后振荡5min、静置25min、重复上述震荡后静置孵育。
6.根据权利要求2所述的由miRNA-211和H2S协同触发的3D DNA network结构的制备方法，其特征在于，S2中M13 mp18 DNA与订书钉链混合的摩尔比为1:10。
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