[发明专利]用于嗜酸性喜温硫杆菌的IPTG诱导型启动子载体及其应用

权利要求书

1.一种适用于嗜酸性喜温硫杆菌的IPTG诱导型启动子载体，其特征在于：所述载体命名为pJRD215-lacI-P_tac(I(II)-luc，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；所述载体是以质粒pJRD215为母体并构建改造的tac启动子P_tac(Ⅰ(Ⅰ)、萤火虫荧光素酶基因luc、氯霉素抗性基因cat、链霉素抗性基因Smr，复制子oriV、接合转移基因mob、复制蛋白基因repA,repB,repC和卡那霉素抗性基因Kanr、大肠杆菌rnB基因的终止子T、优化的阻遏蛋白基因lacI、四环素抗性基因启动子P制得；其中，所述改造的tac启动子P_tac(Ⅰ(Ⅰ)是在原有tac启动子的基础上，将其-35区和-10区之间的序列替换为lacO序列，使得P_tac(Ⅰ(Ⅰ)中含有两个lacO序列，该tac启动子P_tac(Ⅰ(Ⅰ)的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；所述优化的阻遏蛋白基因lacI是根据A.caldus密码子偏好性进行优化，该优化后的阻遏蛋白基因lacI的核苷酸序列如SEQ IDNo.2所示。

2.根据权利1所述的适用于嗜酸性喜温硫杆菌的IPTG诱导型启动子载体，其特征在于：所述萤火虫荧光素酶基因luc的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示。

3.权利要求1所述适用于嗜酸性喜温硫杆菌的IPTG诱导型启动子载体在嗜酸性喜温硫杆菌中诱导表达目的基因的应用。

4.权利要求1所述适用于嗜酸性喜温硫杆菌的IPTG诱导型启动子载体在嗜酸性喜温硫杆菌中研究基因表达调控规律的应用。

5.根据权利3或4所述的应用，其特征在于：所述基因是表达铁摄取调控蛋白Fur的基因fur；所述适用于嗜酸性喜温硫杆菌的IPTG诱导型启动子载体最佳诱导时间为在A.caldus培养的7～9天。

6.一种用于检验权利1所述适用于嗜酸性喜温硫杆菌的IPTG诱导型启动子载体诱导效果的重组菌株，其特征在于：所述重组菌株是重组嗜酸性喜温硫杆菌菌株A.caldus(pJRD215-lacI-P_tac(Ⅰ(Ⅰ)-luc)，其携带如SEQ ID No.1所示核苷酸序列的IPTG诱导型启动子载体，是利用检测萤火虫荧光素酶催化底物荧光虫荧光素发出的荧光来表征IPTG诱导型启动子载体的诱导效果。