[发明专利]一种高纯度地骨皮乙素的制备方法

权利要求书

1.一种高纯度地骨皮乙素的制备方法，其特征在于以下步骤：

1）枸杞或宁夏枸杞植物粗粉碎，0%～50%乙醇溶液加热回流提取，料液比1∶5～1∶50，提取1～5次，提取温度50℃～100℃，每次回流提取30min～300min，提取液经过滤，浓缩至料液质量体积比1∶2～1∶15，静置2～24h，备用；

枸杞或宁夏枸杞植物粗粉碎，0%～50%乙醇溶液渗漉提取，料液比1∶5～1∶50，提取温度10℃～50℃，提取液经过滤，浓缩至料液质量体积比1∶2～1∶15，静置2～24h，备用；

提取方式包括但不局限于如下方法：加热提取、渗漉、冷浸、超声、微波提取；

2）步骤1）得到的上清液上大孔吸附树脂柱，用1～5倍柱体积水洗脱，主要除去极性较大的多糖等成分，再用5%～30%乙醇洗脱，收集醇洗脱液，将5%～30%乙醇洗脱液合并，浓缩，即得富含地骨皮乙素的粗提取物；

3）步骤2）得到的粗提取物，加0%～50%乙醇/甲醇溶液溶解后，进行凝胶材料柱层析，以0%～50%乙醇/甲醇溶液洗脱进行凝胶柱层析，薄层层析检测，将含有地骨皮乙素成分洗脱液合并，浓缩至近干；

4）步骤3）得到的样品，用0%～40%乙醇/甲醇溶液溶解后，进行反相材料柱层析，先用0～10%酸性醇溶液洗脱，除去极性较大的酰胺类生物碱，再用10%～40%酸性醇溶液洗脱，将10%～40%酸性醇溶液洗脱液进行TLC/HPLC分析后合并，回收溶剂至干，即得地骨皮乙素粗品；

5）步骤4）中得到的地骨皮乙素粗品，加水溶解，然后冷冻干燥后密封，即得高纯度地骨皮乙素。

2.根据权利要求1所述的一种高纯度地骨皮乙素的制备方法，其特征在于，所述的枸杞或宁夏枸杞植物为地骨皮、枸杞叶、枸杞子、枸杞根及枸杞全株植物中的一种或多种。

3.根据权利要求1所述的一种高纯度地骨皮乙素的制备方法，其特征在于，步骤2中所述大孔吸附树脂为D-101、HPD-100、HPD-700、ADS-8、HP-20、LSA-20。

4.根据权利要求1所述的一种高纯度地骨皮乙素的制备方法，其特征在于，步骤3）中所述凝胶材料为LH-20，G-25，G-250。

5.根据权利要求1所述的一种高纯度地骨皮乙素的制备方法，其特征在于，步骤3）中薄层层析检测：采用硅胶G板、GF₂₅₄板，分别取凝胶柱不同洗脱段样品和地骨皮乙素对照品溶液各点样2～10μl，以乙酸乙酯-甲酸-乙酸-水/乙酸乙酯-甲酸-水/乙酸乙酯-乙酸-水为展开剂，以碘/碘化铋钾/碘-碘化钾为显色剂，进行显色，日光下检视。

6.根据权利要求1所述的一种高纯度地骨皮乙素的制备方法，其特征在于，步骤4）中所述反相柱使用反相材料为C₈、C₁₈、RP₁₈或ODS。

7.根据权利要求1所述的一种高纯度地骨皮乙素的制备方法，其特征在于，步骤4）中所述酸性醇溶液为0.05～5%的甲酸、乙酸、盐酸、三氟乙酸等酸的醇溶液。

8.根据权利要求1所述的一种高纯度地骨皮乙素的制备方法，其特征在于，步骤4）中所述醇溶液为碳链长度在6以下的能够与水溶液互溶的低级醇溶液，优选甲醇、乙醇、丙醇或异丙醇。

9.根据权利要求1或2所述的一种高纯度地骨皮乙素的制备方法，其特征在于，地骨皮乙素在制备治疗降压、抗肿瘤、降糖、神经元保护和修复、治疗脓毒症药物中的应用。