[发明专利]一种筛选参与脂质缓冲的巨噬细胞亚群的方法

说明书

本发明公开了一种筛选参与脂质缓冲的巨噬细胞亚群的方法，包括以下步骤：1)用染色缓冲液重悬样本细胞，再加入死/活染料，流式抗体，常温避光染色；2)加入染色缓冲液，离心；3)加入染色缓冲液重悬细胞，于流式细胞仪中进行检测。本发明方法通过细胞表面标志物LYVE1、TIMD4共同筛选参与脂质缓冲的巨噬细胞亚群，结果精准明确，为后续进一步研究人的脂质缓冲巨噬细胞与2型糖尿病的关系提供了技术支持。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种筛选参与脂质缓冲的巨噬细胞亚群的方法。

背景技术

肥胖的流行推动2型糖尿病(type 2diabetes mellitus,T2DM)发病率的迅速增高，带来巨大的社会经济负担。脂肪组织是与肥胖关系最为密切的组织器官。随着肥胖的发展，脂肪组织扩张，并发生功能障碍，促进胰岛素抵抗和T2DM的发生。脂肪组织功能障碍的重要特征是免疫细胞浸润引发的组织炎症，而巨噬细胞是脂肪组织含量最为丰富的免疫细胞，也是炎症因子的主要来源，与T2DM的发生密切相关。

巨噬细胞是一种高度异质性的细胞群体，由多个具有不同功能的细胞亚群组成。例如，M1型巨噬细胞通过分泌促炎因子推动炎症和T2DM的发展。除此之外，近年的多项研究提示具有脂质缓冲功能的巨噬细胞也参与糖代谢调控。动物研究已经确定了小鼠脂肪组织中参与脂质缓冲的巨噬细胞亚群，这些巨噬细胞可以防止代谢异常的发生。与之相对的是，临床研究提示人脂肪组织中富含脂质的巨噬细胞与胰岛素抵抗呈正相关。然而，目前尚无在人内脏脂肪组织中筛选参与脂质缓冲的巨噬细胞亚群的方法和应用，也就无法进一步研究人的脂质缓冲巨噬细胞与2型糖尿病的关系。

发明内容

有鉴于此，本发明期望提供一种筛选参与脂质缓冲的巨噬细胞亚群的方法，通过特异的细胞表面标志物针对性高效筛选参与脂质缓冲的巨噬细胞亚群，为进一步研究人的脂质缓冲巨噬细胞与2型糖尿病的关系。

为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

一种筛选参与脂质缓冲的巨噬细胞亚群的方法，包括以下步骤：

1)用染色缓冲液重悬样本细胞，再加入死/活染料，流式抗体，常温避光染色；

2)加入染色缓冲液，离心；

3)加入染色缓冲液重悬细胞，于流式细胞仪中进行检测。

进一步地，所述染色缓冲液为加入1％体积胎牛血清的磷酸盐缓冲液。

进一步地，所述步骤1)或3)染色缓冲液为200μL；所述步骤2)染色缓冲液为1mL，400g离心5min。

进一步地，所述步骤1)加入死活染料0.2μL，流式抗体各2μL。

进一步地，所述步骤1)中流式抗体包括LYVE1，TIMD4。

这里，LYVE1、TIMD4两种抗体特异性筛选脂质缓冲的巨噬细胞亚群，有利于高效精准地分析人内脏脂肪组织巨噬细胞，为进一步研究提供强大的技术支持。

进一步地，所述步骤1)中流式抗体包括CD45，CD11B，CD3，CD19，CD56，CD1C，LYVE1，TIMD4，CD48。

进一步地，所述步骤1)中常温避光染色20min。

本发明有益效果如下：本发明方法通过细胞表面标志物LYVE1、TIMD4共同筛选参与脂质缓冲的巨噬细胞亚群，结果精准明确，为后续进一步研究人的脂质缓冲巨噬细胞与2型糖尿病的关系提供了技术支持。

附图说明

图1为本发明实施例2中脂质摄取能力检测结果图；

图2为本发明实施例2中胞内脂质含量检测结果图。

具体实施方式