[发明专利]一种假想蛋白基因及其引物探针组和用于检测二尖梅奇酵母的应用

说明书

本发明提供了一种假想蛋白基因及其引物探针组和用于检测二尖梅奇酵母的应用，属于二尖梅奇酵母定量检测技术领域。所述用于检测二尖梅奇酵母的基因片段的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，包含所述基因片段的假想蛋白基因的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示，用于扩增所述基因片段的引物探针组如SEQIDNO.3～5所示。本发明提供的用于检测二尖梅奇酵母的基因片段及其引物探针组，具有灵敏度高、特异性强、检测准确性高的优点，能够定量检测河蟹中携带的二尖梅奇酵母的数量，对于由二尖梅奇酵母引发疾病的防控具有重要意义。

技术领域

本发明涉及二尖梅奇酵母定量检测技术领域，尤其涉及一种假想蛋白基因及其引物探针组和用于检测二尖梅奇酵母的应用。

背景技术

中华绒螯蟹俗称河蟹，是我国重要的淡水养殖品种之一。近年来，我国大力推广稻渔综合种养，以实现“一水两用，一田双收，稻渔双赢”的目的。河蟹作为北方地区最适合稻田养殖的品种，发展迅速。随着养殖规模的增大，病害逐渐增多，从2018年开始，北方地区河蟹主产地养殖的中华绒螯蟹出现一种新的病害，主要症状为病蟹反应迟钝、围心腔内可见大量白色乳状液体，养殖户称其为“牛奶病”。该病随苗种传播，死亡率高达100％，造成严重危害。

前期研究发现，河蟹“牛奶病”病原为二尖梅奇酵母，目前国标渔药中尚无有效治疗药物。开展病原早期检测，选择不携带二尖梅奇酵母的中华绒螯蟹苗种进行养殖是预防该疾病的最有效办法。目前，已有2种二尖梅奇酵母PCR检测方法公布(CN112210619A，用于检测二尖梅奇酵母的引物对及其应用，20210112；CN114250317A，一种用于检测二尖梅奇酵母的引物组和试剂盒，20220329)，均具有良好的特异性和灵敏度，为筛选不携带二尖梅奇酵母的中华绒螯蟹提供了技术支撑。最新调查发现，感染二尖梅奇酵母程度较轻的中华绒螯蟹，仅有一部分会发病死亡，而另一部分中华绒螯蟹并不发病，能够继续蜕壳生长至成蟹，并脱去病原感染。这可能与中华绒螯蟹携带二尖梅奇酵母的数量以及中华绒螯蟹本身的免疫能力相关。因此，仅仅通过PCR检测方法测定中华绒螯蟹是否携带二尖梅奇酵母还不能满足生产需求，开展病原定量检测以及进一步提高检测灵敏度十分有必要。

发明内容

本发明的目的在于用于检测二尖梅奇酵母的基因片段及其引物探针组，得到一种灵敏度高、特异性强、检测准确性高的检测二尖梅奇酵母的试剂盒。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种用于检测二尖梅奇酵母的基因片段，所述基因片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明还提供了一种包含所述基因片段的假想蛋白基因，所述假想蛋白基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明还提供了一种用于扩增所述基因片段的引物探针组，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。

优选的，所述探针的5′端标记有荧光基团FAM，3′端标记有淬灭基团BHQ1。

本发明还提供了一种所述的引物探针组和所述的基因片段用于制备检测二尖梅奇酵母试剂盒的应用。

本发明还提供了一种用于检测二尖梅奇酵母的试剂盒，包括所述的引物探针组、阳性对照参考品和阴性对照参考品。

优选的，所述阳性对照参考品为权利要求1所述的基因片段，所述阴性对照参考品为无菌水。

本发明提供的用于检测二尖梅奇酵母的基因片段及其引物探针组，具有灵敏度高、特异性强、检测准确性高的优点，能够定量检测出河蟹中携带二尖梅奇酵母的数量，与二尖梅奇酵母相邻物种无交叉反应，也与其他常见水产动物病原菌无交叉反应，对于由二尖梅奇酵母引发疾病的防控具有重要意义。

附图说明