[发明专利]一种液态发酵中药微生态制剂及其在抗猪流行性腹泻病毒方面的应用

说明书

本发明公开了一种液态发酵中药微生态制剂及其在抗猪流行性腹泻病毒方面的应用，属于抗病毒应用领域。本发明中选取丹参、党参、大青叶、黄芪、茯苓、猪苓和甘草七味中药，粉碎后加水浸泡过夜，文火煎煮浓缩后进行高温高压灭菌，待冷却后加入由植物乳杆菌、双歧杆菌、丁酸梭菌和解淀粉芽孢杆菌组成的混合菌液进行发酵，将发酵液进行过滤，药渣进行二次发酵，合并两次滤液，加入山梨酸钾作保护剂，最终得到该液态发酵中药微生态制剂。该液态中药微生态制剂可抑制冠状病毒PEDV对细胞的感染。

技术领域

本发明涉及一种能抑制PEDV感染的液态中药微生态制剂，属于微生态制剂抗病毒领域。

背景技术

PEDV是线性单股正链RNA病毒，属冠状病毒科(Coronaviridae)；PEDV感染猪以后主要临床症状为呕吐、腹泻、脱水性下痢，对各年龄段猪均有感染性，主要对新生仔猪有高致病率与致死率。

临床主要采用注射PEDV疫苗或返饲法来防控PED，但PEDV容易产生变异，经典疫苗对病毒变异株的保护率低，返饲法防控仔猪腹泻又存在较大风险；市面上也尚无商品化的抗猪流行性腹泻病毒制剂，仍旧以注射疫苗为主；近些年，中药与益生菌渐渐应用于畜禽养殖业，实验室研究表明多种中药、活性成分或其中药复方制剂与益生菌具有抵抗病毒的作用，注射疫苗并用中药、中药制剂或益生菌制剂辅助防控已成为疫病防控的主流。

中药微生态制剂作为运用现代微生态学方法将中药与益生菌联合发酵后用于防治动物疾病的一种新型制剂，具有价格低廉、无残留和不产生耐药性等优势。现代研究表明，中药微生态制剂可通过直接杀灭病毒、阻断病毒对宿主细胞的吸附、入侵和抑制病毒的复制等方式发挥抗病毒作用；中药微生态制剂中的有效成分可通过抑制病毒表面关键受体的表达，或激活细胞基因与多种信号通路，表达多种抗病毒蛋白来抑制病毒感染细胞的过程；此外，中药微生态制剂也可以通过增强动物机体免疫力来间接发挥抗病毒作用，如通过增强自然杀伤细胞毒性、增加T淋巴细胞的细胞毒性来刺激免疫系统，以达到抗病毒的目的。同时中药微生态制剂又能调节炎症因子的分泌，减轻炎症反应，缓解机体的患病症状，达到温和治愈的效果。而将中药与益生菌联合发酵后制得的微生态制剂中富含多种生物活性物质及益生菌产物，如氨基酸、维生素、胞外多糖、乳酸等，这些生物活性物质及益生菌产物以多种方式与途径间接发挥抗病毒的作用。

目前中药微生态制剂在抗病毒领域的研究报告还相对较少，但中药微生态制剂由中药与益生菌复配发酵制备而成，兼具了中药与益生菌的优点与疗效，在抗病毒领域展现出巨大的潜力。

发明内容

本发明的目的是通过液态发酵，提高制剂中中药活性成分含量；本发明的另一目的是针对引起猪流行性腹泻的PEDV，提供一种能抗冠状病毒PEDV感染的液态发酵中药微生态制剂及其在抗猪流行性腹泻病毒方面的应用。

本发明的目的可通过如下技术方案实现：一种液态发酵中药微生态制剂，按以下方法制备：选取七味中药，粉碎后加入中药总质量10~14倍的水浸泡过夜；然后文火煎煮浓缩至原体积的1/5~1/6倍，高温高压灭菌后，加入浓缩液1/5~2/5倍总体积的益生菌混合菌液进行发酵，37℃发酵48小时后，将发酵液进行过滤，滤液备用，将药渣加入8~12倍的水再次煎煮浓缩至原体积1/4~1/5，加入浓缩液1/10~2/10倍体积的混合菌液，进行二次发酵，发酵后再次过滤，合并两次滤液，加入0.5~1.0g/L山梨酸钾作保护剂，最终得到该液态中药微生态制剂；

所述七味中药是丹参、党参、大青叶、甘草、茯苓、猪苓、黄芪，所述中药由丹参3～5份、党参2～4份、大青叶2～4份、甘草2～4份、猪苓1～3份、茯苓1～3份、黄芪1～3份组成，均为质量份；

所述益生菌混合菌液中，植物乳杆菌MⅢ 2~4份、双歧杆菌2~4份、解淀粉芽孢杆菌1~3份、丁酸梭菌1~3份，皆为体积份。

所述解淀粉芽孢杆菌为解淀粉芽孢杆菌L2，该菌株分离自健康鸡的盲肠，具有蛋白酶和淀粉酶活性，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2020570。