[发明专利]用于检测卵泡颗粒细胞发育阶段的基因panel及其应用

说明书

本发明公开了用于检测卵泡颗粒细胞发育阶段的基因panel，包括以下24个基因：Tmem184a,Crip3,Espn,Tmem171,Gatm,Wfdc10,Kctd14,Wnt6,Vim,Acta2,Cald1,Col11a1,Timp2,Ntn4,Ghr,Ctsf,Comp,Lhcgr,Cyp11a1,Gabrb2,Cd24,Lrp11,Prlr和Ptgfr。所述基因panel在检测卵泡颗粒细胞发育阶段中的应用。本发明的基因panel是基于卵巢单细胞核转录组测序和亚细胞水平的空间转录组测序技术筛选得到的。本发明可一次性对24个marker基因进行检测，可以快速、准确地对颗粒细胞定位进行识别判断。

技术领域

本发明涉及用于检测卵泡颗粒细胞发育阶段的基因panel及其应用，属于基因检测技术领域。

背景技术

卵泡发育是卵巢内最重要的生物学事件，反映雌性生殖能力。按照卵泡发育的不同阶段可以将卵泡分为腔前卵泡(Preantral follicle,PAF)，小腔卵泡(Small antralfollicle,SAF)和大腔卵泡(Large antral follicle,LAF)三个阶段。颗粒细胞在卵泡发育中发挥重要作用，且随着发育进展表现出动态转录变化。腔前卵泡对促性腺激素不敏感，其颗粒细胞高表达Amh和Wt1等基因。随着窦腔的出现，卵泡发育开始依赖于促性腺激素的刺激，颗粒细胞空间位置也发生变化，其中围绕在卵母细胞周围的称为卵丘颗粒细胞，而紧紧贴在卵泡膜周围的称为壁层颗粒细胞。相比较而言，卵丘颗粒细胞中Slc38a3，Amh和Ar的表达升高，而壁层颗粒细胞中Lhcgr，Cyp11a1和Cd34表达升高。

如何快速准确的依据marker基因明确颗粒细胞所在卵泡阶段是尚未解决的技术难题。现有技术一般有两种方法筛选颗粒细胞marker基因。一种是依据机械分离得到的细胞进行bulk-RNA测序，通过对差异基因的分析获得对应的marker；另一种是依托于单细胞转录组技术，通过生物信息学分析获得不同亚群的颗粒细胞marker。这两种方法都有一定的技术壁垒，一方面机械分离很难得到高纯度的单一细胞亚群，从而使得捕获的marker基因准确度降低；另一方面，单细胞测序虽然可以得到不同得细胞亚群和对应的marker，但是不能获得颗粒细胞空间位置，这种方法得到的结果同样也会随着分析方法的改变发生变化。除此之外，这两种技术方法得到的结果异质性高，花费较大，且需要依托于复杂的分析才能得出判断结论。

发明内容

针对上述现有技术，为解决现有技术中存在的较难通过单一marker基因鉴定颗粒细胞所属卵泡发育阶段的技术问题，本发明提供了用于检测卵泡颗粒细胞发育阶段的基因panel，能够一次性检测卵泡颗粒细胞所属的发育阶段。

本发明是通过以下技术方案实现的：

用于检测卵泡颗粒细胞发育阶段的基因panel，包括以下24个基因：Tmem184a,Crip3,Espn,Tmem171,Gatm,Wfdc10,Kctd14,Wnt6,Vim,Acta2,Cald1,Col11a1,Timp2,Ntn4,Ghr,Ctsf,Comp,Lhcgr,Cyp11a1,Gabrb2,Cd24,Lrp11,Prlr和Ptgfr。

所述用于检测卵泡颗粒细胞发育阶段的基因panel，在检测卵泡颗粒细胞发育阶段中的应用，在制备用于检测卵泡颗粒细胞发育阶段的检测产品中的应用。所述检测产品包括检测探针、检测抗体、检测试剂、检测试剂盒、基因芯片等。

进一步地，具体应用时，检测待测样本中上述基因panel的24个基因的表达情况，依据表达情况判断卵泡颗粒细胞所处的发育阶段：Tmem184a,Crip3,Espn,Tmem171,Gatm,Wfdc10,Kctd14和Wnt6均高表达者为腔前卵泡阶段颗粒细胞；Vim,Acta2,Cald1,Col11a1,Timp2,Ntn4,Ghr和Ctsf均高表达者为小腔卵泡阶段颗粒细胞；Comp,Lhcgr,Cyp11a1,Gabrb2,Cd24,Lrp11,Prlr和Ptgfr均高表达者为大腔卵泡阶段颗粒细胞。