[发明专利]乳腺癌生物标志物ZNF662基因及其检测方法与应用

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种乳腺癌的生物标志物ZNF662基因及其检测方法与应用。该生物标志物为ZNF662基因，待测样本来源于疑似乳腺癌的患者，该ZNF662基因核苷酸为SEQ ID NO：1。本申请提供了以一种检测ZNF662基因启动子甲基化状态的方法，具体步骤为：①提取DNA样本；②设计引物，采用甲基化检测试剂，通过MSP方法检测DNA样本中ZNF662基因启动子的甲基化水平，判断该ZNF662基因是否发生甲基化，从而实现乳腺癌诊断。本申请通过体内、体外实验率先证实ZNF662作为一个全新的抑癌基因，其在乳腺癌中由于启动子高甲基化而表达下调，为乳腺癌早期诊断标志物的筛选提供了新选择。

技术领域

本发明属于生物学技术领域，具体涉及一种乳腺癌的生物标志物ZNF662基因及其检测方法与应用。

背景技术

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，发病率一直排行全球女性癌症的第一，同时也是全球女性癌症死亡的主要原因之一。在我国乳腺癌的新发病率占女性新发总恶性肿瘤的15％。在治疗方面，手术仍是乳腺癌的首选，与此同时，非手术治疗逐渐变得成熟起来。尽管近年来治疗策略取得了重大进展，但由于乳腺癌是一种异质性极强的疾病，患者的临床表现和治疗反应各不相同，因此乳腺癌患者的临床治疗仍然存在巨大的挑战。早期发现、早期诊断和早期治疗对于改善乳腺癌患者预后，提高患者生活质量具有重要意义。

乳腺癌常见早期筛查技术包括：(1)乳腺超声检查：简单方便，无创无辐射，敏感度和准确度高，但难以发现微小钙化及毛刺样改变，不能可靠区分良恶性。(2)乳腺X线检查：对于各层次结构能清晰显示，对钙化灶敏感度高，但对40岁以下及致密性乳腺诊断准确性欠佳，其辐射性也存在争议。(3)乳腺MRI检查：敏感性最高，对于深部病灶显示好，但检查时间长，价格昂贵，有条件限制使其一般做为上述检查的补充措施。(4)基因检测：作为当今基因组学不断发展的重要成果之一，其在恶性肿瘤早期筛查的临床应用也越来越受到重视，然而乳腺癌缺乏特异性的生物标志物使其受到限制。

DNA甲基化生物标志物定义为在致癌过程中发生DNA甲基化变化的分子靶标。这种生物标志物可用于癌症的早期检测，预测和/或监测治疗反应以及复发性癌症的检测。因此肿瘤特异性DNA甲基化生物标记的发现并检查候选DNA生物标记将其用于临床是目前研发的重点。目前研究较广泛和验证较充分的DNA甲基化生物标记物有：组织因子途径抑制剂2(TFPI2)，Septin9(SEPT9)，谷胱甘肽S-转移酶pi1(GSTP1)，和6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)以及5-羟甲基胞嘧啶。异常DNA甲基化的发现是用于癌症诊断和治疗的特定标记的主要候选对象。近年来，随着临床检验诊断技术的完善与发展，恶性肿瘤中DNA甲基化生物标志物具体的甲基化位点也越来越受关注。但总体而言，DNA甲基化标志物在肿瘤中的临床应用仍需更多的基础研究和临床讨论。

DNA甲基化贯穿于肿瘤发生发展的整个过程中，且由于其敏感性、特异性和易于分析的特点很有希望成为常规的临床肿瘤标志物。

本申请通过基因DNA甲基化检测，提高样本的检测灵敏度和特异性，提高早期诊断率。且利用本方法进行检测，方法简单无创，易行方便，经济实惠，容易被大众所接受。

DNA甲基化检测相较于常规检测手段更有利于早期癌症的发现，原因如下:(1)表观遗传的变化，比如DNA甲基化的改变在肿瘤形成的早期发生，具有组织和癌种特异性；(2)DNA甲基化类型贯穿肿瘤组织和同一类型的肿瘤，但体细胞突变通常只在癌细胞的亚群或克隆中；(3)DNA甲基化在更大的基因区域中保持稳定，因此能通过多个CpG二核苷酸进行检测；(4)可同时设计多对引物进行联合检测；(5)适用于各种体液检测，可用来补充细胞学检测未明或阴性时。

申请号为CN201780015221.8的发明专利公开了ZNF662可作为生物标记物用于子宫内膜癌、卵巢癌、阴道癌、阴门癌、妊娠性滋养层细胞疾病、原发性腹膜癌等妇科肿瘤的诊断，但是并未公开锌指蛋白ZNF662在乳腺癌领域的相关应用。

发明内容