[发明专利]一种3D心脏瓣膜类器官培育器的使用方法

说明书

本发明公开了一种3D心脏瓣膜类器官培育器及其使用方法，包括正面培育盒和反面培育盒，所述正面培育盒包括第一盒体和第一盒盖，所述第一盒盖上设有相互连通的第一加液槽和第一培养槽，所述第一培养槽的底部设有微孔半透膜，所述反面培育盒包括第二盒体和第二盒盖，所述第二盒盖上设有相互连通的第二加液槽和第二培养槽，所述第二培养槽的底部设有镂空托板，所述第一盒体和所述第二盒体内均设有培养液腔。本发明用于3D心脏瓣膜类器官的培育,可以在培育过程中保持内皮细胞层和间质细胞层均与培养液进行充分的营养交换，保证培育的三层心脏瓣膜类器官结构完整的同时，避免发生细胞凋亡，极大提高心脏瓣膜类器官的培育成功率。

技术领域：

本发明涉及生物实验器械技术领域，具体涉及一种3D心脏瓣膜类器官培育器的使用方法。

背景技术：

类器官是近年来新兴的疾病研究模型，国外已有大脑类器官、视杯状类器官、心肌类器官、肠类器官、肝类器官等，而心脏瓣膜类器官在心脏疾病的实验研究中存在大量的应用需求。如专利申请号为RO201900736的专利提供了一种制备瓣膜小叶的三维生物印迹模型的方法，通过制备分离自人瓣膜的瓣膜间质细胞(VIC)悬浮液的混合物，在2×106个细胞/ml的密度下，用预先由猪凝胶制备的凝胶，甲基丙烯酸酐，抗生素，海藻酸钠溶液和光引发剂，将混合物装入生物打印机的注射器中，生物打印3D构建体，然后进行水凝胶光聚合，将交联的构建体转移到通常用于细胞培养的培养基上24小时，在37℃的温度下，体外接种分离自人瓣膜的瓣膜内皮细胞(VEC)，在8×104个细胞/cm2的密度下，将它们保持在37℃的细胞培养箱中，在48小时内，5％CO2在3D构建体表面形成VEC的汇合层并形成VIC的内部细胞网络，然后根据形成钙化中心的能力评估3D模型。专利申请号为ES13811696的专利也提供了一种当细胞和组织层在三维中生长成心脏瓣膜时对它们进行成形和固定的模具和工艺。但是由于心脏瓣膜表面两层薄薄的内皮细胞层与中间的大量间质细胞层组成的三明治结构，现有的心脏瓣膜类器官培育装置在进行培育时，心脏瓣膜类器官朝下的一面内皮细胞由于与培养皿底面接触，会因为缺少氧气与营养物质而发生凋亡，难以形成天然瓣膜上下两层内皮细胞中间是间质细胞的三明治结构，极易导致培育失败。

发明内容：

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供一种3D心脏瓣膜类器官培育器的使用方法，用于3D心脏瓣膜类器官的培育，解决现有技术在进行心脏瓣膜类器官培育时朝下的一面内皮细胞与培养皿底面接触，因为缺少氧气与营养物质而发生凋亡，难以形成正常的心脏瓣膜结构，极易导致培育失败的问题。

(二)技术方案

为解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：一种3D心脏瓣膜类器官培育器，包括正面培育盒和反面培育盒，所述正面培育盒包括第一盒体和第一盒盖，所述第一盒盖上设有相互连通的第一加液槽和第一培养槽，所述第一培养槽的底部设有微孔半透膜，所述反面培育盒包括第二盒体和第二盒盖，所述第二盒盖上设有相互连通的第二加液槽和第二培养槽，所述第二培养槽的底部设有镂空托板，所述第一盒体和所述第二盒体内均设有培养液腔，所述第一加液槽和所述第二加液槽的侧壁上均设有出液孔。

所述第一盒盖可以放置在所述第一盒体上，所述第二盒盖同样可以放置在所述第二盒体上，所述第一培养槽和所述第一加液槽处于所述第一盒体内的所述培养液腔内，所述第二培养槽和所述第二加液槽处于所述第二盒体内的所述培养液腔内，所述正面培育盒用于培养间质细胞层与一层内皮细胞层，所述反面培育盒用于培育另一层内皮细胞层，所述正面培育盒于所述反面培育盒的结构均为一个可加在12孔板、24孔板或者48孔板的盒状结构，所述第一加液槽和所述第二加液槽均用于往所述第一培养槽或第二培养槽内添加培养液，所述出液孔用于使所述第一加液槽和所述第二加液槽内的培养液可以与所述第一盒体和第二盒体内的培养液流通，所述第一培养槽底部的所述微孔半透膜用于承托间质细胞层并使间质细胞可以与所述第一盒体内的培养液进行营养物质的交换，保证培养顺利，所述镂空托板用于承托内皮细胞层并使内皮细胞可以与所述第二盒体内的培养液进行营养物质的交换，有效防止细胞因为不透气或者缺少营养物质而凋亡。