[发明专利]一种有核细胞表面连接蛋白的方法及其应用

说明书

本发明属于细胞工程领域，公开了一种有核细胞表面连接蛋白的方法及其应用。这种方法包括：对有核细胞进行巯基化修饰，得到活化的有核细胞；对蛋白进行马来酰亚胺化修饰，得到活化蛋白；将活化的有核细胞和活化蛋白混合孵育，使活化蛋白与活化的有核细胞偶联。该方法能高效地将蛋白连接在有核细胞表面，但不影响细胞活力，可用于提高有核细胞靶向迁徙能力，及特异性结合损伤组织的能力。

技术领域

本发明属于细胞工程领域，具体涉及一种有核细胞表面连接蛋白的方法及其应用。

背景技术

对于一些具有组织修复能力或抑制、清除能力的细胞，通常需要特异性结合或靶向迁徙到待修复或待抑制、清除的细胞周围，以发挥相应的作用。如间充质干细胞(MSCs)是中胚层来源的干细胞，具有易获得、易培养、低免疫原性等优点，MSCs能在宿主体内长期存活并在微环境诱导下迁徙到损伤部位分化形成组织细胞，参与组织修复，但是MSCs在体外扩增培养后存在靶向迁徙能力不足的缺陷。这主要是由于MSCs在体外培养的过程中，其表面丢失了靶向迁徙所需的表面分子，如选择素配体、整合素、趋化因子等。通过增加这些表面分子的表达水平，可以恢复MSCs的迁徙能力，传统的方法是增加MSCs对编码这些表面分子的基因的表达，但是这种方法较复杂，需要对细胞进行基因改造才能上调这些表面分子的表达，且这种方法产生的表面分子是通过非共价键(如氢键、疏水键或范德华力等)结合到细胞上的，这种结合的结合强度较低，细胞与靶组织结合不牢固。

因此，有必要提供一种在细胞表面高效连接蛋白的方法。

发明内容

本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种有核细胞表面连接蛋白的方法，能够高效地将蛋白连接在有核细胞表面，但不影响细胞活力。

本发明还提出一种有核细胞。

本发明还提出有核细胞表面连接蛋白的方法或有核细胞在制备靶向组织损伤部位和/或肿瘤细胞的产品中的应用。

本发明还提出一种组合物。

根据本发明的一个方面，提出了一种有核细胞表面连接蛋白的方法，包括以下步骤：

S1：对有核细胞进行巯基化修饰，得到活化的有核细胞；对所述蛋白进行马来酰亚胺化修饰，得到活化蛋白；

S2：将所述活化的有核细胞和所述活化蛋白混合孵育，使所述活化蛋白与所述活化的有核细胞偶联。

根据本发明的一种优选的实施方式，至少具有以下有益效果：

本发明首先对待连接的蛋白进行马来酰亚胺化修饰，对有核细胞进行巯基化修饰，马来酰亚胺基团和巯基基团可以共价结合，这种通过化学修饰形成的共价结合的强度要高于细胞表面配体-受体之间的非共价结合(如氢键、疏水键、范德华力等)的强度；且在进行巯基化修饰时，可以使得有核细胞表面可同时连接大量的待连接的蛋白。

因此，本发明将有核细胞同时与大量的待连接蛋白通过共价结合而连接，实现了有核细胞表面高效率地连接蛋白，进而促进有核细胞高效发挥其相应的功能。

在本发明的一些实施方式中，所述有核细胞包括但不限于间充质干细胞、免疫细胞。

在本发明的一些实施方式中，用于所述马来酰亚胺化修饰的试剂包含NHS酯基团和与所述NHS酯基团相连的马来酰亚胺基团。

在本发明的一些实施方式中，所述NHS酯基团通过环己烷间隔臂连接所述马来酰亚胺基团。

在本发明的一些实施方式中，所述NHS酯基团为磺基-NHS酯基团。

在本发明的一些实施方式中，所述试剂通过NHS酯基团与待连接的蛋白的氨基(-NH₂)反应，从而对蛋白进行马来酰亚胺化修饰，得到活化蛋白。